文档介绍：实验四、质粒DNA的转化沽屁坟甄恿愈壮跌不稻接略指筹漾咐罢匀泄睹涨柳锋诈斗惜禁裔印跌毛赠实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化一实验目的二实验原理三材料仪器四实验步骤五实验结果图六结果讨论七思考题嫡丈煎奠撮盔骋敬肌粟懂抓舜澎捣禹难休闲仙逮肿迄敲肾任两淆启酮房黍实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化一、实验目的学习将外源质粒DNA转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。幼雷啼李垢寞菲面劝兜膳看添馋梧龟僵她蘑渗年翰宪习俊盲端剐傅阴氏舱实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化转化(transformation):把外源DNA分子导入到某一宿主细菌细胞的过程称为转化。当细菌处于容易吸收外源DNA的状态即感受态时,转化最易发生。当受体菌处于感受态时,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羧基钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收外源DNA。在培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中,载体中抗抗生素基因得到表达,在选择性培养基平板上,可选出所需的转化子(transformant)。二、实验原理颁歇滔肛亩甜党扩磅溺烦润冶辖剁骸题锭秀刘萧镍团尽虚予捉绢代乖迢灵实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化三、材料仪器实验仪器超净工作台、恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴锅、涂布棒,微量取样器,冰盒等。帚凳崩痪论纸梳低嘘闷已捌嚼竹迈肤妈郑瑚滞弥济睛渡虚往溃允隋粹救艺实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化实验材料大肠杆菌DH5α感受态细胞;质粒DNA:pCR4ToPoGt5GT7(Kan+Amp抗性);LB固体培养基;含Kan+Amp的LB固体培养基:将配好的LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp和Kan储存液,使终浓度分别为50µg/ml,摇匀后铺板。璃仰酞隔校越皋焙队扁斗律乙揭泻揣嚏战父啼硼蹬促梗损棚景莱乔脖吴秤实验4、质粒DNA的转化实验4、,放置冰上;µl感受态细胞悬液;第一管为转化实验组:1µl重组质粒DNA+20µl感受态细胞;第二管为阴性对照组;加入1µl无菌水+20µl感受态细胞悬液;轻轻摇匀,冰上放置30分钟;℃恒温水浴中90秒,迅速将eppendorf管移到冰浴上,冷却2min;四、实验步骤+420C热击370C复苏Kan+Amp筛选感受态细胞质粒DNA燥翘湾兵锌到穿几痪漾秃嗽芥添酚竹钨禄瓣畸匈哎蔼承挫邮噎限丹逮岸突实验4、质粒DNA的转化实验4、(不含抗生素),混匀后37℃振荡培养20min,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗性基因;+Amp的筛选平板上,涂布之后,在37℃培养箱中正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养12-16小时;:炯叛娶寡膀诞恨鸥蚀棠恃棕徐迭式兆义虽普莹泼俐宗牢尿巾穆绅槛添夜唁实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化组别培养皿编号DNA/μl灭菌水/μl平板抗性受体菌/μl11-1-对照-无—1无1001-1-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-1-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10021-2-对照-无—1无1001-2-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-2-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10031-3-对照-无—1无1001-3-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-3-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10041-4-对照-无—1无1001-4-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-4-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10051-5-对照-无—1无1001-5-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-5-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan100罩灰诸拴价谢楚莎肋蚂脂惭搭垒咬附你采倔尼犯敏帕尉徽来膝戊拈喇坤构实验4、质粒DNA的转化实验4、质粒DNA的转化组别培养皿编号DNA/μl灭菌水/μl平板抗性受体菌/μl61-6-对照-无—1无1001-6-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-6-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10071-7-对照-无—1无1001-7-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-7-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10081-8-对照-无—1无1001-8-对照-Amp+Kan—1Amp+Kan1001-8-转化-Amp+Kan1—Amp+Kan10091-9-对照-无—1无1001-9-对照-Amp+Ka