文档介绍：1基因启动子荧光素酶报告基因质粒的构建【摘要】目的:构建人切除修复交叉互补基因1(plementation1,1)启动子荧光素酶报告基因质粒。方法:以人基因组DNA为模板,1启动子,将其重组到荧光素酶报告基因载体pGL4Basic中,1启动子序列。结果:测序结果正确,质粒pGL4-1-P1构建成功。结论:1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功,可以用于后续基因表达调控的研究。【关键词】报告基因;1;启动子中图分类号R文献标识码B文章编号1674-6805(2014)14-0144-1LuciferaseReporterPlasmidPromoter/SONGYing,GUYi-xue,QIUQin-wei,etal.//ChineseandForeignMedicalResearch,2014,12(14):144-145【Abstract】Objective:plementation1(1):1promoterfromhumangenomicDNAwasamplifiedbyPCR,:essfulconstructionoftheplasmidpGL4-1-:essfullyconstructed,whichcanbeuseforfurtherstudyongeneexpressionregulation.【Keywords】1;Luciferasereportergene;PromoterFirst-author’saddress:AffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510095,China切除修复交叉互补基因1(plementation1,1)是核苷酸外切修复酶家族重要成员之一,同时也是核苷酸酶切修复系统和链内交联修复DNA途径中的关键基因[1]。有研究表明,该基因与肺癌的铂类化疗耐受相关,1的转录调控机制[2]。1启动子荧光素酶报告基因,1基因的表达调控和揭示肺癌的铂类耐药机制提供有力的工具和手段。(Plasmidminikit)和琼脂糖凝胶回收试剂盒(GelExtractionkit)购自OMEGA;限制性核酸内切酶BglⅡ、KpnⅠ、T4DNA连接酶均购自Fementas;1KbDNAmaker和PremixTaqTM()均购自TAKARA;DNA提取试剂盒(TIANampGenomicDNAkit)购自TIANGEN;大肠杆菌感受态Top10和质粒pGL4Basic为本室保存。+1,选取上游-3000bp序列,1的启动子序列,。为了便于回收扩增片段,在基因序列5’端分别加上BglⅡ和KpnⅠ酶切位点(下划线处)。引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成。ForwardPrimer:5’-GGGTCTGATTGAGATTTTGG