文档介绍：东北师范大学
硕士学位论文
糖皮质激素诱导绿色荧光蛋白(GFP)在烟草中的表达
姓名:王俊杰
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:王兴智
20050501
摘要导剂的敏感程度相对滞后一些。在质粒构建过程中派两端分别加上马铃薯《糖皮质激素化学诱导表达体系以嵌合型转录因子;。山湍傅腉结合域,单纯疱疹病毒蛋白的酸性活化域和哺乳动物糖皮质受体调节域融合而成。在没有诱导荆糖皮质激素存在的情况下,鞍子肫渌鞍仔纬傻鞍赘合体保留在细胞质中;加入诱导剂后,诱导剂与鞍捉岷鲜沟鞍追⑸涔梗肫他蛋白脱离后进入细胞核内与诱导启动子结合,启动目的基因的表达。本实验利用农杆菌介导的方法,将携带双元诱导表达系统的载体H氲揭生型烟草当中,经过鉴定,初步建立了糖皮质激素诱导表达系统。在这个系统当中,转录因子幕蛴勺槌尚云舳控制表达,绿色荧光蛋白基因作为诱导表达的目的基因在诱导启动子的控制之下。诱导启动子由串联的上游激活序列鸵桓鑫⑿启动予组成。绿色荧光蛋白的转录受到诱导剂的严格调控。未加诱导剂地塞米松,斯ず铣商瞧质激素保觳獠坏铰躺ü獾鞍椎谋泶铮尤胗盏技梁笫紫仍赗水平检测到了除后绿色荧光蛋白停止表达。诱导剂对基因表达的调控首先表现在新生叶上,老叶对诱姆欠肭峁砻鞣欠肭⑽匆种坡躺ü獾鞍椎谋泶铮O乱徊绞匝奠定了基础。低扯杂盏技辆哂蟹浅8叩淖ㄒ恍裕⑶叶曰虮泶锏目刂品浅Q格,几乎没有基础表达,可以从时间空间及数量上对目的基因进行精确调控,这一系统的建立为今后利用化学诱导的方法进行理论和应用研究奠定了基础。关键词:化学诱导系统;诱导剂;绿色荧光蛋白;非翻译区的转录,绿色荧光蛋白随着诱导剂地塞米松的扩散沿叶脉开始表达,当诱导剂去
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学位论文作者签名:耋选盘。指导教师签名:丝童蚕学位论文作者签名:。取辏航独创性声明学位论文版权使用授权书期:叮籎日本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他入已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得东北师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已本学位论文作者完全了解东北师范大学有关保留、使用学位论文的规定,即:东北师范大学有权保留并向国家有关部门或机授权东北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ期:苘丁!工作单位在论文中作了明确的说明并表示谢意。构送交学位论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人学位论文。学位论文作者毕业后去向通讯地址日期:电话:邮编:日
言办法例如用组织特异性启动子启动基因的表达【蛴没肪骋蛩赜盏嫉钠舳影ㄈ化学诱导表达系统植物转基因技术作为探索基因功能的一种有力手段在基础研究和生物技术应用方面被广泛应用。一般情况下,,当一个基因的表达需要限制在特定的组织或特定的时间内时,这种启动子的应用就会受到限制。外源基因的组成性表达可能会干扰正常的生理过程,在某些情况下可能对植物有害甚至致死】。为了更精确的调控外源基因在植物中的表达人们想出了很多激【⒐庹炕蛘叽瓷擞盏肌K淙欢计鸬揭欢ㄗ饔茫窃诶砺垩芯亢陀τ梅矫娑加另外,他们仅能应用于某些细胞类型以及特殊组织。环境因素诱导启动予同样存在问题诱导表达导致意想不到的效果,使目的基因表达难以控制。为了更有效的调控外源基因的表达,人们建立了化学诱导体系,通过加入或去处特异的诱导剂或抑制剂可以控制特异基因的开启或关闭,通过对诱导剂或抑制剂的调节,可以对目的基因进行时间、空间和数量的控制。化学诱导系统的应用始于世纪年代末,在短短年得到了突飞猛进的发展,其中有些体系已被应用于多个领域,而且表现出非常大的潜力傲腥缣瞧质激素诱导体系K孀抛;蜃魑锏牟欢贤乒阕;蜃魑锒曰肪车挠跋焓艿皆嚼丛蕉的关注,其中一些选择基因的漂移是为人们所关注的一点哼没в盏继逑悼梢运时随地控制基因的表达,或者将选择基因切除,在生产实践中也发挥了一定作用。为获得对基因表达的精确控制建立理想的化学诱导体系已经成为许多研究者追求的目标。.硐氲挠盏急泶锵低秤β愕囊G理想的化学诱导体系应当能从时间空间及数最上对基因表达精确调控因此应当满安全性:诱导剂不具多效性,不诱导植物的生理反应,尤其不能影响植物的营养代有效性:诱导前,本底表达水平低或无本底表达,诱导后,表达量明显升高:去除诱导剂后,基因表达迅速关闭:诱导作用起效时间短,表达水平对诱导荆的浓度变化反应灵敏。特异性:基因的表达只对外部添加的诱导剂作出反应,而不会被内源物质所激活。可应用性: