文档介绍：中国海洋大学
硕士学位论文
杂合肽PM23的分子设计与表达和从猪血中提取血红素技术的研
究
姓名:宋珊珊
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:胡国斌
20090601
猪血中提取血红素技术的研究杂合肽的分子设计与表达和从要摘抗菌肽,是生物界中广泛存在的一类具有抗菌活性的短肽,是天然免疫系统中的重要免疫分子,具有抗菌谱广、活性稳定,不易产生耐药性等优点,在食品、饲料、医药领域具有重要的应用价值。谴佣颈饶坑愕恼衬ぶ蟹⑾值模愿锢际弦跣院脱粜跃哂广谱抗性作用的小肽。是从泥鳅中分离出来的、具有抗细菌和真菌活性而无溶血活性的抗菌肽。本实验以蚆;。谰菘咕结构与活性的关系,利用生物信息学工具计算了杂合肽的物化参数并预测了其二级结构;其中杂合肽籑,简称,为螺旋抗菌肽,具有较强的正离子性和两亲性,是最具潜力的杂合肽。根据所设计的分子序列,并参考大肠杆菌偏爱密码子,用化学合成法合成了基因,同时在序列的两端引入双酶切位点,将该基因定向插入带有相同酶切位点的融合表达载体一中,构建了重组表达质粒一一;,菌落秆⊙粜钥寺。珼测序验证插入序列;使用诱导融合蛋白表达,狿缬竞偷鞍酌庖哂〖<觳獗泶锊铮槐泶产物经亲和层析纯化后,进行肠激酶切割和抗菌活性检测。菌落虳测序证实了基因已被正确地插入靥逯校痪璉盏螅受体菌中融合蛋白的表达量达到峰值,此时约占总蛋白量的%;所表达的融合蛋白的分子量约为,具有抑制大肠杆菌的活性;酶切结果表明,融合蛋白中含有分子量约为脑雍想腜本研究为抗菌肽的生产提供了一条重要的途径,并为进一步研究抗菌肽的生产表达、结构与功能和设计新型的抗菌肽药物奠定了基础。关键词:抗菌肽;分子设计;;原核表达;抗菌活性.:
⒋慷任%。血红素是细胞蛋白的组成部分,具有多种生物学功能和广泛的应用价值。利用猪血制备氯化血红素能够变废为宝,同时防止废弃血液直接排放可能带来的环境危害,因此具有重大的环保意义和经济价值。本文选用超声波破碎法和丙酮蒸馏法相结合的方式从猪血中制备氯化血红素。’为研究超声波破碎红细胞的最佳条件,采用正交试验法,以血红蛋白含量为指标,研究了去离子水添加量、超声波功率和超声破碎时间对血红蛋白浓度的影响。血红蛋白含量的测定采用碱羚高铁血红素一法进行。结果表明,去离子水加入量为红细胞体积的、超声波功率和破碎时间浅波破碎红细胞的最佳条件。为了提高丙酮蒸馏法制备氯化血红素的收率和获得高纯度的氯化血红素,研究了不同的值、抽提时间、搅拌速率和丙酮添加量等工艺参数对氯化血红素的收率和纯度的影响。试验结果表明,:焖氐淖罴压ひ仗跫辉诖斯ひ仗跫拢关键词猪血;氯化血红素;萃取;丙酮蒸馏法;工艺条件
...琈,琣籱,,,,琾瓺瑃伊猘甈猚猘..猙琲,.,
.瑃:瓵%.瑃,,;;;;,瓵一
琽.’..ィ瑀琾,.,篐;;.
确弱一期:刃严学位论文作者签名济竹帅移只签字日期:聊夕年多月と学位论文作者签名:芥删埘签字日期:朋暾荚拢琾独创学位论文版权使用授权书声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得ⅲ喝缑挥衅渌枰L乇鹕鞯模纠缚煽或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎适用本授权书导师签字:
第一章杂合肽的分子设计与表达第一节前言咕牡难芯拷肽、细菌抗菌肽、病毒抗菌肽等同菡等,8菘咕亩韵妇⒄婢爸抗茵肽的来源和分类抗菌肽的结构和抗菌活性关系抗菌肽珹阋迳现复嬖谟谏锾迥诰哂械钟界微生物侵害,清除体内突变细胞的一类小分子多肽,称之为“第二防御体系狭义的概念是指某些昆虫经外部刺激后产生的具有抗菌作用、分子量在笥的肽类物质,对革兰氏阳性、阴性细菌均有抑杀作用。通常意义上的抗菌肽是指由基因编码在核糖体上合成的多肽,具有分子量小、水溶性较高、热稳定性好、免疫原性较低、作用迅速、抗菌谱广等特点障┑龋换谱匀坏龋,不仅可以抑杀细菌、真菌、病毒和寄生虫,对多种癌细胞、转化细胞和实体瘤也有明显的杀伤作用,且有些抗菌肽在发挥以上作用时没有抑制正常细胞顺龋;胡金川等,2煌诖晨股刈饔没疲咕牟皇芗翰哪药性突变影响,而且对靶菌株也不易出现耐药性突变,另外其独特的选择毒性作用和其较低的免疫原