文档介绍：白灵芝总糖和粗蛋白含量的测定与测定方法的比较
田晓琳
摘要目的探讨白灵芝中的总糖和蛋白质含量的测定及测定方法的比较。方法测定白灵芝的方法有硫酸—苯酚法和硫酸—蒽酮法,3,5—二硝基水杨酸法;蛋白质的测定有多种方法,如折射率法,紫外吸收法,凯氏定氮法等方法。本文分别用硫酸—苯酚法和3,5—二硝基水杨酸法测定总糖;紫外吸收法,双缩脲法及考马斯亮蓝法来快速测定白灵芝中蛋白质的含量,探讨了两种快速测定总糖和蛋白质含量的方法,在测定方面的区别,并对两种方法进行具体的分析比较。结果3,5—二硝基水杨酸法是测定多糖含量较理想的方法;而考马斯亮蓝是测定蛋白质含量较灵敏和理想的方法。
关键词白灵芝多糖蛋白质测定方法
白灵芝又名玉芝,拉丁学名为Polyporus lucidum Leyss. Fr。它为多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(LeysslexFrl)Karstl或紫芝GanodermasinenseZhaolXuetZhang的干燥子实体[1].其化学成分复杂,目前已知主要含有多糖(肽)类、三萜类、核苷类等[2]。辛平无毒,主治咳逆上气,益肺气,通利口鼻,强志意,安魄)。抱朴子中描述白芝如"截肪",因此苦白蹄可能为此类。这种真菌菌肉质白,如马蹄状,大者可数斤,生于松树和其他针叶树上。野生白灵芝又名苦白蹄,采自长白山区,菌肉洁白,味奇苦,为灵芝罕见品种。对心血管疾病有特效,祛风除湿,止血、化痰,抗癌。主治心脑血管病症、高血脂、动脉硬化、冠心病;贫血、神经衰弱、哮喘、气管炎、前列腺炎、尿急尿频;肝癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌;急慢性肝炎、早期肝硬化、风湿病、消化道溃疡、肺结核等。改善睡眠,排毒、美容、提高免疫力及滋补强身等。白灵芝多糖类具有抗肿瘤作用、免疫调节作用、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等作用,被认为是白灵芝扶正固本的重要有效成分[3] 。白灵芝营养丰富,白灵芝中,野生平盖灵芝含麦含角甾醇、有机酸、D-甘露糖、氨基葡萄糖、多糖类、甘露醇、脂肪酸、氨基酸、多肽、葡萄糖胺、腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶、内酯、香豆精、三萜类以及多种酶类和多种微量元素,其中有机锗含量高达1238ppm,有机硒含量也很高白灵芝有抗癌保健之功效。是美容养颜的极品之选。白灵芝有护肾、益功效,是好的上等补品。
材料与方法
材料
白灵芝:由长春师范学院生化实验室提供。风干、磨碎并通过 100 目铜筛。
主要仪器及试剂
试剂
浓盐酸:ρ=.
浓硫酸:ρ=.
50g/L苯酚溶液:称曲5g苯酚(C6H6O,重蒸),用于溶解于100ml容量瓶中,定容后摇匀。至棕色瓶,置4℃冰箱中避光贮存。
100mg/L葡萄糖标准溶液:将葡萄糖于105℃恒温烘干至恒重,(),用于溶解于1000ml容量瓶中,定容至刻度后摇匀,置4℃冰箱中贮存,两周内有效。
100mg/L标葡萄糖溶液: 0g葡萄糖()于100mL烧杯中,加水溶解,定容至1000mL,置4℃冰箱中贮存。
1 mg/ml葡萄糖标准溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,。
3,5—二硝基水杨酸试剂: g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中),再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
碘-碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH:称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
% 酚酞指示剂:1g酚酞溶于95%的乙醇中然后定容至100ml。
6 mol/L HCl溶液: 将12mol/l的浓盐酸:蒸馏水=1:1.
双缩脲试剂:取硫酸铜( Cu S0 4 5H 2 O ) 和酒石酸钾钠( NaKC 4 H 4 O 6 .4H 2 O ) ,溶于 500m1 蒸馏水中,在搅拌的同时加入 300m1 10% 氢氧化钠溶液,定容至 1000 ml ,贮于涂石蜡的试剂瓶中。
的 NaOH:将5g氢氧化钠溶解并定容至250ml.
标准酪蛋自溶液:准确称取酪蛋白溶于 / L 的 NaOH 溶液中,并定容至 100m1, 即为 10mg/m1 的标准溶液。
标准蛋白质溶液称取100mg牛血清白蛋白,溶于蒸馏水并定容至100ml,制成 1mg/ml的原液。
标准蛋白质溶液:准确称结晶牛血清白蛋白,配制成浓度为1mg/ml 的溶液。