文档介绍：1ABI Prism?7500型荧光定量PCR仪用户基本操作培训美国应用生物系统中国公司客户服务部2内容提要1、仪器简况2、定量PCR的数学原理3、定量PCR的化学原理4、等位基因鉴定原理5、定量PCR实验6、定量PCR的数据处理7、日常维护8、应用举例仪器简况47500功能一览?绝对定量(Absolute Quantification)–自动计算基线、阈值、CT值、浓度、百分比?相对定量(Relative Quantification)?等位基因分型(Allelic Discrimination)?阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC)57500推荐使用的荧光组合报告荧光(Filter A)FAM?或SYBR?Green I报告荧光(Filter B)VIC?或JOE?报告或淬灭荧光(Filter C)NED?或CY3?或TAMRA?参比荧光(Filter D)ROX?或Texas Red?报告荧光(Filter E)CY5?定量PCR的数学原理7PCR曲线有两种表达形式线性图谱半对数图谱8典型的PCR分4个阶段平台期线性增长期基线期指数增长期9起点定量与终点定量?起始DNA量是样本中本来的量,更有意义;终点DNA量经过PCR “加工”,不是研究所需要的数据?起点定量误差小,终点定量误差大同一个样品重复96次终点定量起点定量10什么是CT值定义:从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数CT值必须位于指数增长阶段内线性图谱半对数图谱CT值CT值