文档介绍：
降低酵母双杂交方法检测蛋白质相互作用
假阴性率的方法#
杨帆,马素参,高友鹤**
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(中国医学科学院,基础医学研究所,病理与病理生理系)
摘要:目的:蛋白质相互作用是生物有机体内各种生化机能的功能基础｡酵母双杂交技术具
有高通量､高效便捷､且能检测弱的､瞬时的蛋白质相互作用的优点,是一种常用的研究蛋白
质相互作用的方法。LacZ 基因作为报告基因在酵母双杂交中较为常用,在目前筛选应用中
要求条件较为严格｡根据前期试验以及对 LacZ 检测原理进行分析,我们认为严格的筛选条件
可能提高酵母双杂交的假阴性率,遗失部分重要的、弱的相互作用信息｡因此本实验重新评
估 LacZ 检测对酵母双杂交实验假阳性率､假阴性率的贡献。
方法:本实验运用酵母双杂交技术,利用 ZO-1 蛋白 PDZ1 和 GOPC 蛋白 PDZ1 结构域筛选 C
末端随机多肽文库,并记录酵母克隆生长时间和状况｡筛选所得克隆进行β-半乳糖苷酶检测
试验,记录变蓝时间及变蓝程度｡对所得阳性结果和传统意义上的阴性结果均提取质粒进行
测序｡对所得克隆的氨基酸组成特性及序列规律进行分析｡
结果:实验表明 LacZ 检测结果变蓝程度与相互作用配体序列结合特性相关｡常规检查所认为
的非阳性克隆与阳性克隆具有相似的序列特性｡
结论:实验证明主流常用的 LacZ 报告基因配合使用严格的筛选条件能够造成一定的假阴性｡
放宽筛选条件,延长筛选周期,扩大测序范围以结合序列的规律性为主要参考可以找到更多
未知的､弱的､瞬时的相互作用｡酵母双杂交实验应该记录酵母生长初始时间､变蓝时间程度,
可提示相互作用强弱,也许可以作为衡量相互作用强弱的指标｡
关键词:生物科学;酵母双杂交;LacZ 报告基因;假阴性;假阳性;弱相互作用
中图分类号:
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Method to reduce false negative rate of yeast two-hybird
assay
YANG fan, MA sucan, GAO youhe
(Department of Physiology and Pathophysiology, School of Basic Medicine Peking Union
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Medical College, Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences
100005)
Abstract:
Objective: Protein-protein interaction is essential in multiple biological processes. Yeast
two-hybrid is a classic method to study protein-protein interaction. LacZ is monly used
reporter gene in this assay, which we found may increase the false negative rate of this method.
Methods: Yeas