文档介绍：分泌蛋白的跟踪 FollowingaProteinOutoftheCellPulse-,克劳德和泡特(KeithRobertsPorter,1912—1997)发表了培养细胞的第一张电子显微镜照片,首次发现了一些新的细胞亚显微结构一线粒体和内质网,这次重大突破开启了现代细胞生物学的一扇大门,为随后全面深入研究细胞精细结构奠定了基础。帕拉德对细胞电子显微镜研究的一项重大贡献是改进了细胞固定技术。当时锇酸(Os04)由于可快速高效保持培养细胞内部的精细结构而被广泛应用于电子显微镜研究,但锇酸对生物组织内的细胞研究却存在很大困难。帕拉德认为这是由于锇酸酸性难以控制的原因,因此引入缓冲液方法以保证相对稳定的pH,这种改进使组织细胞结构研究成为可能,这种固定液也被称为帕拉德固定液[5]。帕拉德还对电子显微镜研究的其他方面进行了革新,如塑料包埋材料的应用和超薄切片技术的完善,这使2O世纪5O年代早期细胞电子显微镜照片清晰度得到极大提高,从而发现了更多的细胞内细节。橱碍蛛个翠毖妈禄奏颖琐酸才抿伯丸霹革矩函廷第菏廊柠嘱详当箍仓剂腰分泌蛋白的追踪分泌蛋白的追踪将细胞与放射性标记的合成底物(属于某些途径或大分子)一起培养,:用放射性同位素标记的前体化合物对细胞或个体进行短时间的标记,以研究代谢合成动态的生物技术。放射自显影术(radioautography;autoradiography)用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素(如14C和3H)标记的化合物导入生物体内,经过一段时间后,将标本制成切片或涂片,涂上卤化银乳胶,经一定时间的放射性曝光,组织中的放射性即可使乳胶感光。然后经过显影、定影处理显示还原的黑色银颗粒,即可得知标本中标记物的准确位置和数量,放射自显影的切片还可再用染料染色,这样便可在显微镜下对标记上放射性的化合物进行定位或相对定量测定。网梦苇雅搔到勤稚瞪斩垒肖韦藩捂睛舷蛆讯继膊靡挺嗅阿京狄溪词体斟若分泌蛋白的追踪分泌蛋白的追踪研究背景除了合成蛋白质来行使细胞功能,许多细胞还必须产生和分泌其他蛋白到细胞外履行职责。蛋白分泌的机制迷住了许多细胞生物学家,包括帕拉德。在分泌的研究的早期,细胞被破坏,各种细胞器被离心分离。这些细胞分级分离的研究表明,分泌的蛋白是存在于与内质网(ER)相关联的膜结合的囊泡细胞和质膜,在那里它们被合成,,帕拉德转向了新开发的技术,高分辨率放射自显影,放射性标记的蛋白质在细胞内移动时,使他可以跟踪它们。他的工作产生深远意义的发现是该分泌蛋白在囊泡内的移动是从ER到高尔基复合体,然后到质膜。诸收吝断穴禁己员劈盒钵蒜瓷媒浆卸逼艘优捞癣戎庞初匠椎挣悯迭隆否躲分泌蛋白的追踪分泌蛋白的追踪帕拉德由于对现代细胞生物学诞生和发展做出了许多奠基性贡献而被生物学界誉为“现代细胞生物学之父”尘易窘抛拧溺胶翼肉敌腺淫篓滩崖沂麻蛀蠢绽泽姐贡体物火氓窒馒椿锹伪分泌蛋白的追踪分泌蛋白的追踪帕拉德想要确定哪些细胞结构和细胞器参与蛋白质的分泌?[3H],将动物处死,并且固定胰腺组织.(因为帕拉德发现该器官拥有大量分泌细胞,这些分泌细胞存在大量粗糙内质网,并且还发现胰腺分泌细胞中的酶原颗粒可作为消化酶的暂时储存位点。憨征悄化齐师莲墩截桩抵棘噪况掌箕姻皇劝践语虱故粒絮寿印沏响瓣酌拱分泌蛋白的追踪分泌蛋白的追踪为了彻底解决这一细胞器的蛋白分泌的作用?(为了阐明蛋白分泌过程,帕拉德再一次在技术上做出了重大革新——他改进了适合蛋白质研究的细胞内同位素示踪体系,同时还发展了放射自显影的电子显微镜方法),[H3]亮氨酸,短时间内被称为“脉冲”。随后的“追”的时期,,[3H]亮氨酸的媒体中3分钟。(在脉冲结束时)。。(a)在一个3分钟的时间标记与[3H]亮氨酸结束时,组织被固定,切片电子显微镜,并进行放射自显影。大多数标记的蛋白质(放