文档介绍：赣南师范学院生命与环境科学学院毕业论文实验方案论文题目:滤纸糖化力法测定纤维素酶活性条件的研究学生姓名:刘淼学号:100907025指导老师:卢占军博士起止时间:2013年3月-6月实验原理:利用蛋白质分离纯化方法,从枯草芽孢杆菌中分离出纤维素酶,将其分别作用于羧甲基纤维素(CMC)和滤纸,--二硝基水杨酸(DNS)反应生成棕红色物质,利用分光光度法测出纤维素酶的活性强度。纤维素酶滤纸糖纤维二糖、葡萄糖等还原性糖+DNS棕红色物质药品材料:氢氧化钠、葡萄糖、--二硝基水杨酸(DNS)、硝酸、冰醋酸、醋酸钠、酒石酸、滤纸、纤维素酶制剂;仪器:分光光度计、恒温水浴锅、干燥箱、分析天平;实验设计:一、实验前期准备工作:1、醋酸-醋酸钠缓冲液的配制:量取冰醋酸6ml,定容至1000ml,。,溶解后容至1000ml,。使用时以4:6的比例混合,低温冷藏备用。2、葡萄糖溶液的配制:将葡萄糖在恒温干燥箱中105℃下干燥至恒重,准确称取100mg于100mL小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,移入100mL容量瓶中用蒸馏水定容至100mL,充分混匀。3、--二硝基水杨酸的配制:,用少量蒸馏水溶解后,加入2mol/LNaOH溶液262mL,再加到500mL含有185g酒石酸钾钠(C4H4O6KNa·4H2O,MW=)的热水溶液中,再加5g结晶酚(C6H5OH,MW=)和5g无水亚硫酸钠(Na2SO3,MW=),搅拌溶解,冷却后移入1000mL容量瓶中用蒸馏水定容至1000mL,充分混匀。4、葡萄糖标准曲线的绘制:取8支洗净烘干的25mL具塞刻度试管,,。配制成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后,,摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至25mL,充分混匀。在540nm波长下,以1号试管溶液作为空白对照,调零点,测定其它各管溶液的光密度值并记录结果。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,以对应的光密度值为纵坐标,在坐标纸上绘制出葡萄糖标准曲线。二、滤纸对实验的影响分析:由于滤纸中也含有一定量的还原性糖,所以试验中应该排除底物对实验的影响。称取等量碾碎的滤纸与DNS充分反应,测其OD值。三、酶促反应时间的研究:酶的反应时间不同,其产物浓度也不一样。依次取反应时间为0min2min4min6min8min10min12min14min的反应体系,加入DNS充分显色测其OD值。四、DNS试剂量的确定:DNS本身也具有一定的颜色,如果过量也会对实验结果造成影响,所以应该设计实验确定DNS的加入量。取相同酶反应体系,,测其OD值。五、吸收波长的确定:取450nm-590nm波长段,以每20nm一个区段,分别测其OD值,绘图分析结果。六、沸水浴显色时间的确定:取相同酶反应体系,DNS沸水显色分别取1min3min5min7mi