文档介绍：毕业论文实验方案   题目:淀粉降解菌合成学校:上饶师范学院班级:12生科2班专业:生物技术      。:淀粉,;,;K2HPO42g/L‘/L’MH4Cl1g/L‘;;各种生长因子及无机盐离子;;pH值为7合成培养基:淀粉;尿素(不同含量),(ZHWY-2112B)、纯化将5g样品(土壤污泥)加入装有150mL富集培养基的500mL的三角瓶中,30℃时,摇床培养24h后,吸取1mL富集液后分别用培养基筛选稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5,分别进行涂布,30℃恒温培养24h,反复摇床3次,挑取单个菌落于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上进行纯化培养,30℃培养24h,对生长菌进行镜检,获得单菌落。%的尼罗蓝染色剂进行染色处理,10min后,用水洗净染色剂并用滤纸吸干水分。:生物脂肪大多是以脂肪颗粒的形式存在的,可被苏丹黑B染成蓝黑色的脂肪粒,是筛选产脂肪菌株较为理想的方法。将上述得到的纯培养菌株转接到发酵培养基中,37℃,150r/min振荡培养36h后,5000r/min离心10min,弃上清液。,%(m/v)苏丹黑B染色15min,倾去染色液,二甲苯冲洗至洗脱液无色,%(m/v)蕃红复染10s,去离子水冲洗、吸干后镜检,定性检查有无蓝黑色的脂肪颗粒为标准进行初筛。复筛:分别取两环Stoke斜面培养基上活化了的初筛获得的菌株,放入80mL种子培养基中,37℃,150r/min振荡培养36h。取此培养液2mL转接于装有80mL发酵培养基的三角瓶中,同上述条件培养36h。从发酵液中提取PHA并测定其含量,进行复筛。、;,盖上盖玻片,至于显微镜下,在低倍镜中找到细菌,并将其移到视野中央(此时看到的只是一块一块的,并非单个细菌,要想看到单个细菌形态需要增加放大倍数),:原理:通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,,培养48h后,培养液3500r/min离心处理30min,将离心沉淀物冷冻干燥10h,然后沸水浴30min,反复冻融3次。将冻