文档介绍：中国医科大学硕士学位论文褪黑素对大鼠肝再灌注损伤的保护作用姓名:李建一申请学位级别:硕士专业:外科学指导教师:张文海20030401审文摘要,劈?亭u:一~/肝移植瞬前已成为治疗终末期肝病、肝肿瘸、先天性肝胆疾病的重要且有效的治疗方法,但是肝褥灌注损伤仍是制约肝移植成凌鳇主要因豢之一。焉灌注损嫠豹发病橇理髦今巍未被凳全阐明。褪黑索(Melatonin,Mel)是松果体腺细胞分泌的神经内分泌激素,由于其在多系统、多脏器发挥籍复杂的生理、药理作用,因此疆益受到人假的重规两成为研究憋热点。在黧蠢,有关褪黑素在褥灌注损伤方蟊露研究较少,有关Mel在肝再灌注损伤审的作用瓣见报道。/本实验以大《《【l为研究对象,建立肝再灌注损伤模型为乎段,按时点采集标本,对血清肝组织生化酶系(ALT,AST,AKP),耩组织匀浆l簿凑过氧纯物懿终产镌(MDA)及肝缓级菝氧纯酶系(SOD,)进行测定;对肝组缀进行HE染色及ICAM~1免疫组化染色,光镜下观察肝组织细胞形态学改变;并在此基础上进行睦镜殛察翳缨施孩及缨藤器,探瓣褪黑素怼大鼠器要灌注摄臻的影响作用藏其机制。谯亚细胞(鬣白表达)水平上,探讨褪黑素对肝再灌注损伤保护作用的机制,为褪黑素在临床肝脏外科的应耀提供蒎据。/实验材料姆方法l一、(体重:1909一21%,周龄:6—7周),建撬努努褪黑素楚溪缝(Mel缀)、滔綮溶攥薅爨塑(Alc缓)·1·纛生理盐隶对照缀(NS组)。建立翳嚣漶注损伤模餐,缺蛊对阐均为60分钟,、lh、6h、12h、24h采集标本。2。魂耪模鍪隧备参照Kobayashi法,采崴以动脉夹央闭肝门静脉左支、肝动肝左支、发肝管60分钟之后放群,建立大鼠肝盔叶、中叶再灌注损饶搂墅。(Melatonin)lg,酒精生理盐嫩溶解后低温保存,按体重20mg/kg薅重诗算绘药量甓,予块盘翦箱分锋鹱靛注射;漆媒对照疆采取与Mel疆相鬲浓纛的酒精液,生理盐永对照组瘸注射同比例的生理盐水。4+标本采集及处理4,l麻藓绘翁方式嚣粼羹麻醉采取用硫喷妥钠缺胤手术前45分钟(即腹腔给药前l=5分钟)大鼠股二头胍肌庭注魅,接40ms/ks体重绘药。4。2摆美试蓟HE染色及免疫组化标本均采用多聚甲醛磷酸缓冲液。电镳标本则采用Kamovsky液。SOD、、MDA试剂盒均购自礴京建残生饕工程研究甄。盘裳证藉关试潮魏塞德隧塞灵曼公勰。ICAM一1试剂盒购自英国Serotech公司。,党学显擞镶及其熊像系统/全盘费生讫分耩靛/番媾坊冀橇/分光竞度诗/德注承浴/魏磁揽箨器/离心辊,趣声乳化机4,4标本的采集第一步:大鬣巍涛生讫蘸系第二步:大鼠肝组织匀浆潮二醛及抗筑化酶系·2·第三疹:大鼠肝脏形态学、免疫维纯及电辘取材二、’、A瓣、AKP的灏定(自动基仡分辑仪)、CSI-~硫代巴眈妥酸法2+2SOD鹣测定~—SP法5。:免疫缀纯结暴在400结光镜下观察,计算每个高倍襁野中10t3个细胞中阳健缅胞个数,每张切片计数5个视辩,求出翡值用嚣土S表承,得出陋蛙细腿率。,缀间比较采餍方差分析,各缀闯裙蹴采用SNK梭验。实验结暴l。(P<0。05),显Ale锺与NS组楣比元显著性差异。l。2ASTAST衣蒜灌注茬6。铀、12,镰、24。跳时点的Mel组摄著低于Ale及NS对照组(P<),且各时点内Ale组与NS缝耪魄茏显著缝差异。-(P<),且各时点内Alc组与NS组相比无显著性差异。(丙二醛)、、(P<),且各时点内Ak组与NS组相比元显著性差异。、(P<),且各时点内Alc组与NS组相比元显著性差异。、(P<)