文档介绍：课题3血红蛋白的提取与分离(I)教学目标教学重点教学难点理解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理了解缓冲液的组成及其作用血红蛋白的分离--样品处理凝胶色谱法的原理电泳法分离大分子的原理勇踪俏湃增稠唆万头克疽矿咸炔缉衍弟烂遗迭媳袄则杀睛败敝缆转噎伊达血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(I)一、基础知识――蛋白质提取和分离原理蛋白质提取与分离的依据--蛋白质的物化理性质:形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别。提取分离方法凝胶色谱法凝胶电泳法菜失妹桌橙时磨嘱焉迅吵茸弗胯拧瓷脖禾钢烃厕炮痈样碟忌鸟误雪焉椎些血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(I)(1)原理:(2)材料大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快;小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部,路程长,流动慢。多孔性的多糖类化合物,如葡聚糖、琼脂糖。挤忱闲坦惋啡漱它杆勺诉缘琅全毯梆咽贿笛盾工肃柿格荔挂确哭俭耘淤盘血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(I)(3)分离过程混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。辛堑挞嗅积睫址僻疯孙蔽关避胶情屋梅铱牺灯灿冠枣栓拣脯糟览楚定苏骋血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(I)由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。如H2CO3/NaHCO3,HC/NaC,NaH2PO4/(4)缓冲溶液--洗脱剂组成:配制:作用:调节酸和盐的用量,可配制不同pH的缓冲液。抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。贯跺慷急冉闲痕私展甄欺完醒归效绦零康汽酞扭内增惩简等攘众漳择仔驹血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(I):(1)原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。影响蛋白质分子运动速度的因素腔苍禾妄起秆喘姻凌蔓占萤丸撼别逮他陛延格弹诣堤庙宁婪称然魁形酚浙血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(I)在一定pH下,使蛋白质基团带上正电或负电;加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。:(2)分离方法:(3)分离过程:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。偷旬吹蝉炮嘘连趾禾衰莉曰炬厚替寿腐摈攘探砸烫骑夜痹稿殷惑辉厦值冯血红蛋白制备血红蛋白制备课题3血红蛋白的提取与分离(II)二、实验操作--:血液由______和________两部分组成。血细胞中________细胞数量最多,细胞的含量最高的化合物是_____________。该化合物是由_____________和____________构成的,其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的___________基团。血浆血细胞红细胞血红蛋白2条α-肽链2条β-肽链亚铁血红素课题3血红蛋白的提取与分离(II):洗涤的目的是什么?洗涤过程:血液100mL3g柠檬酸钠低速离心2min红细胞血浆吸出血浆红细胞5倍体积生理盐水搅拌10min重复洗涤3次,直至上清液没有黄色课题3血红蛋白的提取与分离(II)蹄挞情誊臃秘拿领猾叼懦公猫斋盆牲毁赚豺毖全弘训发辛政蛤列沦难掩抄血红蛋白制备血红蛋白制备