文档介绍：摇摇圆园员圆允怎造苑苑愿怨
安徽医科大学学报粤糟贼葬哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤;源苑( ) · ·
孕栽耘晕基因真核表达载体的构建及在酝郧远猿中表达
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徐生林,胡勇,金问森,王明明,王京,王娟
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摘要目的构建基因真核表达载体,为基因科学院细胞库; 酶试剂盒、胶回收试剂盒、
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功能研究提供工具。方法从人淋巴细胞中提取总, 产物纯化试剂盒、聚合酶、连接酶
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采用反转录聚合酶链反应扩增基因编码区,将其克和限制性内切酶、等均购自
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隆入载体中。通过聚合酶链反应、酶切和公司;质粒提取试剂盒购自爱思进生物技术有限
测序鉴定所构建的载体。脂质体包裹重组载体转染骨肉瘤鄄
酝郧远猿砸栽鄄孕悦砸宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼公司;胎牛血清、蕴谷氨酰胺购自杭州四季青生物工
细胞, 和检测转染后的骨肉瘤蕴蚤责燥枣藻糟贼蚤灶圆园园园韵责贼蚤鄄
酝郧远猿孕栽耘晕皂砸晕粤摇程有限公司; 、无血清培养基
细胞中基因和蛋白质表达情况。结果酝耘酝陨灶增蚤贼则燥早藻灶酝糟悦燥赠忆
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经过限制性酶切和测序鉴定得到重组子大小符购自公司;淋巴细胞分离液、
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合,序列与中人的基因( ) 培养基购自公司; 感受态细菌购
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完全一致。转染基因的骨肉瘤细胞中自北京天根生物技术有限公司;各引物的合成及
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基因和蛋白高水平表达。结论成功地构建序列测定均由上海生工公司完成;小鼠抗人
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了基因真核表达载体。单克隆抗体、兔抗人单克隆抗体购自碧
摇孕栽耘晕
关键词;分子克隆;真核表达;骨肉瘤;载体
摇砸猿源砸猿源怨援缘圆云天公司。其他化学试剂为市售试剂。
中图分类号; 援
粤员园园园原员源怨圆圆园员圆园苑原园苑愿怨原园源员圆摇载体的构建
文献标志码文章编号( ) 援援孕栽耘晕缘皂造
员圆员摇基因的获得摇取人血,加于装有
缘皂造
摇摇员园淋巴细胞分离液的离心管内,使分界明显。
第号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源员缘园园则辕皂蚤灶员缘皂蚤灶孕月杂
责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻葬灶凿贼藻灶泽蚤灶澡燥皂燥造燥早赠凿藻造藻贼藻凿燥灶离心。吸出淋巴细胞层,用
基因( 圆砸晕粤
糟澡则燥皂燥泽燥皂藻贼藻灶孕栽耘晕员怨怨苑猿液洗涤、离心次,将淋巴细胞移至去酶的离
, ), 年由个研究小组几栽砸陨扎燥造员皂造缘皂蚤灶
孕栽耘晕辕酝酝粤悦员辕栽耘孕员心管,加,在室温下孵育,使核蛋白
乎同时克隆并分别命名为: ,后圆园园造员缘
糟阅晕粤质完全裂解后加氯仿,振荡混匀冰上放置
经比较三者基因定位, 编码的蛋白,证实为同皂蚤灶源益员圆园园园则辕皂蚤灶μ员缘皂蚤灶
。离心。吸取上层水相
一基因。它的编码蛋白具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸园郾缘皂造缘
员至另一离心管中。加入异丙醇,冰上放置
酶双重特异性磷酸酶活性,是迄今为止发现的第耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀耀