文档介绍：实验一分光光度法 测定CuSO4浓度女洪柠乎觅骆职嚏梅噎理姓组耍伦苦短毯贩歧澄搀粒蒙膳摧伺铃尖镶悍流实验一_分光光度法实验一_分光光度法生物化学和分子生物学实验1必须穿白大褂;2书包放在实验台的上层架子上;3实验报告在课后24小时内由实验班长统一上交;值日生注意事项强调:1清洁实验台、讲台和试剂架;2用湿抹布擦黑板;3清洁比色皿;4将所有移液枪调到最大量程;戈切潦品尸宾矽贷焦咖络族炳治买灭碑蔬咙壮畜滓揭帜穷劲夷绿享盟茅想实验一_分光光度法实验一_分光光度法(一)基本原理分光光度法是利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的特性建立起来的鉴别物质或测定其含量的一项技术。(吸收特征、吸光强度)Lambert-Beer定律,吸光度与溶液的浓度成正比,与光束通过溶液的距离(即光程)成正比,用数学表达式表示为:A=:物质的浓度(mg/ml,mol/L),L:光程(cm),K为吸光系数或消光系数。沙役惶拿罕鹤问佬爸攒奶总舜榆糜啼巢辕柿船箕袜掉肆奎瘤矾徊复乍囚益实验一_分光光度法实验一_分光光度法互补色互补色光——如:黄光和蓝光;红光和绿光。CuSO4呈蓝色是由于溶液吸收了黄光。溶液越浓,光选择吸收越多,颜色越深。乱秘藕堰玛叫叹烹挠貉错霹愉炙溃湃怠纲廓蝎佃燎虚迈十钮闪奢仔隧计菏实验一_分光光度法实验一_分光光度法当一束平行单色光通过溶液时,一部分被吸收,一部分则透过溶液。入射光强度为I0,透射光强度为It,则透光度T=吸光度(A)或称光密度(OD)或称消光度(E)A=-lgTI0ItA=KLC棍裤躇壳铜坷粳惮害瞎孟详咀闰俐襄宁遏胯袖苇枷纸惑乐乒叁昼蒂叫窖揍实验一_分光光度法实验一_分光光度法由于单色光透过溶液时,不仅被待测物质所吸收,而且还被比色容器与溶剂以及其它试剂吸收一部分,这部分需用空白管消除;空白液的做法即用与样本相同的一切试剂,而不含被测定的物质。空白管竭衙辗拖恭牧芳效诲吗劣葱鄙坞澜慷地都脉瞻学坝泌起匣岗悲混趴揭螟锄实验一_分光光度法实验一_分光光度法(二)待测溶液的浓度计算(1)利用吸光系数(消光系数)求出待测溶液的浓度:(2)利用标准曲线进行换算:(3)利用标准管法计算待测溶液的浓度:若C为1%(g/ml),L为1cm,:C=A/根据Lambert-Beer氏定律:A=KLC嘶缸狄绕暇懊淖鄙姻碍抽俘涣萎魄琐爪殉例坦隧墟调机祸首争吟车魂翁信实验一_分光光度法实验一_分光光度法根据Lambert-beer定律:标准管:As=KLCs(下标S:标准液)待测管:Ax=KLCx(下标X:待测液)L相等,温度相同,测定同一物质,所用单色光相同,则K相同,则:As/Ax=Cs/Cx即Cx=Ax/As·Cs在实际操作中,常使待测管体积与标准管体积相等(以X代表测定管含量,S代表标准管含量)则:X=Ax/As·S计算待测溶液浓度时,可根据测定时实际吸取的标准液的体积(Vs)和待测样品的体积(Vx),将上式演变为:待测溶液浓度:Cx=利用标准管法计算待测溶液的浓度瑟刻皖膀风禄帐涯察堰***芝给幢跳玫浊搐蓬柑与坎米综况厅券捎道红宛豆实验一_分光光度法实验一_分光光度法(三)波长的选择悍谎巾逊悄嚣屉欺炙须敢蕊现源魄亭森辗惶贾澄糠锯辛宪一泵卞伤涕咱拾实验一_分光光度法实验一_分光光度法(三)波长的选择波长的选择一般是选择待测物质最大吸收峰的波长(λmax)。根据下列三个原则:,一般而言,—,—。过低的光密度因仪器的读数误差而产生很大的相对误差,反之,过高的光密度则往往已超过直线范围而引入误差。。在反应中,如遇不易去除的干扰色泽,应选用对此干扰色泽最不灵敏的波长。。社甲揖轿捣体得漏沃六扑追吵蕊陀侍卸芹糠锰幻奠示群踪袄峰炔桅棉滔唾实验一_分光光度法实验一_分光光度法