文档介绍：实验九:荧光分光光度法测定维生素B2的含量一、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计基本原理、结构及性能,掌握基本操作。二、实验原理维生素B2(又叫核黄素,VB2是橘黄色无臭的针状结晶。其分子式为:C17H20N4O6,分子量:。VB2分子中有三个芳香环,具有平面刚性结构,因此它能够发射荧光。VB2易溶于水而不溶于***等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解,对热稳定。VB2溶液在430~440nm蓝光的照射下,发出绿色荧光,荧光峰在535nm附近。VB2在pH=6~7的溶液中荧光强度最大,而且其荧光强度与VB2溶液浓度呈线性关系,因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。VB2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素,光黄素也是一个能发荧光的物质,其荧光比VB2的荧光强得多,故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内,且在避光条件下进行。实验九:荧光分光光度法测定维生素B2的含量在稀溶液中,当实验条件一定时,荧光强度F与荧光物质浓度c呈线性关系:F=Kc,这是荧光光谱法定量分析的依据。注意:高浓度时,荧光物质发生熄灭和自吸收现象,使F与c不呈线性关系。三、主要仪器与试剂主要仪器:荧光分光光度计;1cm石英皿;25mL比色管;1mL、5mL移液管试剂:;待测样品溶液四、实验步骤1、、、、、,各加入去离子水稀释至刻度,摇匀。、、、、。待测。2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem=540nm为发射波长,在250~500nm范围内扫描,记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线,便得到激发光谱。从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。从得到的激发光谱中找出最大激发波长,在此激发波长下,在450~700nm范围内扫描,记录发射强度与发射波长间的函数关系,实验九:荧光分光光度法测定维生素B2的含量便得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长λem。数据记录于表1中。3、标准溶液及样品的荧光测定将激发波长固定在最大激发波长,荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处。测量上述系列标准VB2溶液的荧光发射强度。数