文档介绍：1荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验报告——应用化学(环境检测与分析)一、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能,掌握其基本操作。二、实验原理1什么是荧光?荧光是光致发光。当物质的分子接受光子能量被激发后,从激发单重态的最低振动能级返回基态时发射的光。23荧光与环境因素的关系取代基的性质、溶剂的极性、体系的pH和温度。维生素B2(VitaminB2),别名:核黄素(Riboflavin,RF),是橘黄色无臭的针状结晶,分子式:C17H20N4O6,相对分子量为:。因其色黄且含有核糖醇,故称为核黄素。结构式为:2由于分子中有三个芳香环,具有平面刚性结构,因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于***等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解,对热稳定。维生素B2溶液在430—440nm蓝光的照射下,发出绿色荧光,荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH=6—7的溶液中荧光强度最大,而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系,因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素,光黄素也是一个能发荧光的物质,其荧光比维生素B2的荧光强得多,故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内,且在避光条件下进行。在稀溶液中,荧光强度F与物质的浓度c有以下关系:F=,荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系:F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。三、仪器与试剂1、主要仪器:荧光分光光度计(日立F—7000);比色皿:1cm;容量瓶:50mL;移液管:5mL。2、试剂:核黄素;维生素B2药片四、:精确称取2mg核黄素(VB2),用超纯水于50ml棕色容量瓶中定容待测液的配制:将维生素B2药片研磨成粉末状,精确称取2mg,用超纯水于50ml棕色容量瓶中定容;,、、、、。用超纯水作空白试样,测定溶液荧光强度值。用所测结果绘制荧光强度(F)对浓度(c)的曲线。、实验结果及数据处理λex=442nm4λem=524nmVB2标准曲线及药片中VB2含量的测定(大浓度)VB2标准曲线及药片中VB2含量的测定(稀释到中间浓度)5六、总结、讨论1、实验注意事项:(1)配制标准溶液时,为了减少仪器偏差,取不同体积的同种溶液应用同一移液管。(2)因荧光是从石英池下部通过,所以拿取石英池时,应用手指捏住池