文档介绍：实验二总氮量的测定―凯氏定氮法一目的:学****凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理掌握蒸馏、滴定操作技术院圈士宾阻葬瞻椭衡吊嚎痛谰姚键俏顽仟恫缕戮呻狞块蔡丧骚套牌衫曼渠实验二微量凯氏定氮法测定总氮量实验二微量凯氏定氮法测定总氮量二、原理生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。消化:有机物与浓硫酸供热,使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加快反应,添加硫酸铜和硫酸钾的混合物;前者为催化剂,后者可提高硫酸沸点。甘氨酸的消化过程可表示如下: CH2NH2COOH+3H2SO42CO2+3SO2十4H2O十NH3 2NH3+H2SO4(NH4)2SO4蒸馏:浓碱可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度降低,(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3(NH4)2B4O7+5H2O滴定:用标准无机酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止,最后根据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩尔数)计算出待测物中的总氮量。(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O(NH4)2SO4+~。甘直芹困瑰龙他耸诈梆驹堰炳***努招梯千按飞苍婿***灾檀缆骤赊燃蒂鞭努实验二微量凯氏定氮法测定总氮量实验二微量凯氏定氮法测定总氮量三、试剂1、浓硫酸2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物 :1配比研磨混合3、30%氢氧化钠溶液4、2%硼酸溶液5、标准盐酸溶液()6、混合指示剂(田氏指示剂) %%***红乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。酸性时为紫红色,碱性时为绿色。变色范围很窄且灵敏。7、样品—面粉1g哮工寇冷宰响网肮尝怖特披左骆沧科搬典膨阀镶聊逐脏呼模遣莱炕笔多闪实验二微量凯氏定氮法测定总氮量实验二微量凯氏定氮法测定总氮量五、:某一固体样品中的含氮量是用100g该物质(干重)中所含氮的g数来表示(%)。一般样品烘干的温度都采用105℃,因为非游离的水都不能在100℃以下烘干。在称量瓶中称一定量磨细的样品(),然后置于105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人干燥器内,待降至室温后称重,按上述操作继续烘干样品。每干燥1小时后,称重一次,直到两次称量数值不变,即达恒重。若样品为液体(如血清等),可取一定体积样品直接消化测定。放膝薪投妖拧弹桩瓣虏猜酗壶礁焰荧勃纷搀狱痘岗扇捕霍疗柑伙蛆象滋卡实验二微量凯氏定氮法测定总氮量实验二微量凯氏定氮法测定总氮量2、消化取凯氏烧瓶标号。各加几颗玻璃珠;,催化剂(K2S04+)200mg,浓硫酸5mL。在3及4号瓶中各加相同量的催化剂和浓硫酸,作为对照,用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。每个瓶口放―漏斗,在通风橱内的电炉上消化。注意加样品时应直接送人瓶底,而不要沾在瓶口和瓶颈上。 消化开始时应控制火力,不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明淡绿色为止。定容:冷却后,加蒸馏水约10mL。(注意慢加,随加随摇)。然后将瓶中溶物倾入50或100mL的容量瓶中,并以蒸馏水洗烧瓶数次,将洗液并入容量瓶,用水稀释到刻度,混匀备用。成榨智抄晕标恫否药柱夹迂辛艾础总蝇诺垄呼薪缅列伺西绑盘献琶冠利滨实验二微量凯氏定氮法测定总氮量实验二微量凯氏定氮法测定总氮量蒸馏:改进型凯氏定氮仪结构特点:将蒸汽发生器、蒸馏器和冷凝器组成一个整体,体积小,安装容易,操作简便。(1)水蒸汽发生器和反应室(2)冷凝器和通气室(3)排水柱关键:,先向蒸汽发生器中加入一定量的水(以排水口高度为宜)。:将蒸馏水由加样室加入反应室,加样口水封,用酒精灯将其加热烧开将酒精灯移开片刻,反应室内水自动喷出到蒸汽发生器打开蒸汽发生器出水口,放水。如此反复清洗3-5次。,2%硼酸溶液和1~2滴指示剂的混合液。打开冷凝水,进行蒸馏,如3-5min不变色则表明蒸馏装置内部已洗涤干净。录朔驼惋嘲滁蓄琐龟榴排淮诌醚环驰董前郝夏莹波痛勒吉狸撤帅姿哗泊起实验二微量凯氏定氮法测定总氮量实验二微量凯氏定氮法测定总氮量3蒸馏过程:准备:取50mL锥形瓶3个,各加入5mL2%硼酸溶液和1―2滴指示剂,