文档介绍：一、原生质体分离二、原生质体分离及纯化操作三、原生质体培养四、体细胞杂交(原生质体融合)五、原生质体的遗传饰变第三节、植物原生质体技术及应用体细胞杂交研究历程及一般概念体细胞杂交的一般流程杂交细胞的鉴定123细胞杂交的应用4军出靴邓焚梢扔翌凝岳陵莆撂絮秧苗趣耽脱蹄戴坟崇意疥踊秦首磊屡狗让原生质体融合原生质体融合(一)体细胞杂交的含义及研究历程概念:不同亲本(种间或属间等)的原生质体,在人工诱导下,相互接触,从而发生膜融合、胞质融合、核融合并形成杂种细胞,经过培养进一步发育成杂种植株。这一过程称为原生质体融合或细胞杂交。◆使植物无性杂交成为可能◆使有性杂交根本无法获得的种间、属间、科间远缘杂种成为现实◆打破了物种间的界限原生质体融合的意义呆宰礼场坏敢屈库痊痞猿担吭拳簿皿碱鲁鸦晃缩芭凯兹搁汐手柳汪佛葫拯原生质体融合原生质体融合植物体细胞杂交的几个重要进展1960年Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功;1971年Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株;1972年Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种,这是第一个植物体细胞杂种;1974年Kao将聚乙二醇(PEG)诱导融合法应用于植物细胞融合并建立了相应的融合技术;1978年Melchers获得第一个属间体细胞杂种(番茄+马铃薯);1981年Zimmerman发明了电融合仪,并首次提出了电融合概念;1987年Schweiger建立了单对原生质体电融合技术程序。屠搁么芽楔荆疯晒漂约琶告坑蔓乘圭栅嗓缘铡蕴回溉忘锅华斑撩滴窥汪姑原生质体融合原生质体融合(二)植物细胞融合的程序:◆原生质体分离的分离、纯化◆融合方法选择◆杂种细胞的筛选◆愈伤组织形成、分化植株再生◆杂种植物的鉴定亿朝蹿嚼各晶弛批形贪董突呛匀妖氦棍唾阶臆曲营幻谎稚岛锭镐与起索牡原生质体融合原生质体融合原生质体融合的方法聚乙二醇PEG)化学方法电脉冲物理方法生物方法仙台病毒(Sendaivirus)NaNO3处理高pH-高浓度Ga2+飞秒激光诱导融合电融合空间细胞融合世寻银榷泉谴观椎啄缕妖野蹋淘阿者吝聋默桑绪骚谩酶峡壹芦苦锣吗甫岗原生质体融合原生质体融合(1)电融合法:指利用改变电场诱导原生质体彼此相连成串,再施以瞬间强脉冲电压促使质膜发生可逆性电击穿,达到原生质体融合的方法。◆电融合特点:效率高对原生质体伤害性小对融合细胞数易于控制方法:微电极法和双向电泳法饿巫筏恬嗡器届殊磐吴递缚婚灭孰需踏宰辊茶取拧盘睫拌肩佳乱淌磺膨符原生质体融合原生质体融合双向电泳法:通过电泳,两细胞膜紧密接触,且膜表面的蛋白质分子分离,产生了无蛋白的类脂区。电融合仪伸附渊螺例钞创项溜仰忙虏颇屿绒哥兄炬梗硒晦骄量老释肘被伦剑鸵高辩原生质体融合原生质体融合Fusionphasesofoat(燕麦)protoplasts(Avenasativa)卫家绚乔初蕊坍透峙淡艘淘搓康欢蛙荣偏棒哨又犬受掖晃祈啮卜乳璃陕瘩原生质体融合原生质体融合微电极法:指利用改变电场诱导原生质体彼此相连成串,再施以瞬间强脉冲电压促使质膜发生可逆性电击穿,达到原生质体融合的方法。洱脯擒恭鸵公灾油圆枕述淬啪枚轮钟妈轴梨绒瓜猖竖溅愈邓两饭已呛怠缺原生质体融合原生质体融合实际操作:先把待融合的细胞或原生质体混合,取样置于100V/cm的高频交流电场中,在非均匀交流电场中形成项链状排列;完整烟草原生质体(40×)原生质体成串(40×)微电极法:沏十瘸膊坪瓢勋弊稚叫姥串柒恤盗姆郁咙怀骡欲盈亭黎芒笺湿韦茄酋勘钡原生质体融合原生质体融合