文档介绍：基于质谱分析的蛋白质组学蛋白质组学010203生物质谱技术生物质谱在蛋白质组学中的研究利用Content蛋白质组学蛋白质组(proteome):PROTEins+genOME,意为protein expressed by genome—基因组表达的全部蛋白质蛋白质组学(proteomics):The study of the proteome—研究全部蛋白质的存在及存在形式的一门学科根据研究目的,蛋白质组学可分为表达蛋白质组学(expression proteomics)结构蛋白质组学(structure proteomics)功能蛋白质组学(functional proteomics),,,细胞中各种蛋白质之间的相互作用关系及其调控网络,以及蛋白质的转录和修饰蛋白质组学研究路线主要技术1. 双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)第一向:等电聚焦(IEF),根据蛋白质的等电点进行分离第二向:SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳,(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)采用专有的荧光染料与多重样本和图像分析的方法,在同一块胶上可同时分离多个有不同荧光标记的样品,并以荧光标记的样品混合物为内标,对每个蛋白质样品和每个差异都可以进行统计学可信度分析生物质谱技术质谱是带电原子、分子或分子碎片按质量的大小顺序排列的图像质谱仪是一类能使物质离子化并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或轨道稳定与否实现质量比分离,并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱仪主要由分析系统、电学系统和真空系统组成基本原理:通过对被测样品离子的质核比的测定来进行分析的一种分析方法。被分析的样品首先要离子化,然后利用不同离子在电场或磁场的运动行为的不同,把离子按质荷比(m/z)分开而得到质量图谱,通过样品的质量图谱和相关信息,可以得到样品的定性定量结果。质谱技术的发展1912英国物理学家 Thomson研制成功第一台质谱仪20世纪20年代质谱成为一种分析手段被化学家所采用40年代开始质谱广泛用于有机物质的分析1966 Munson&Field报道了化学电离源,质谱第一次可以检测热不稳定的生物分子80年代随着软电离技术(快原子轰击FAB、电喷雾ESI、基质辅助激光解吸MALDI)的发展,生物质谱得到了飞速发展软电离在质谱分析中,离子源是将分子离解成离子或解离成碎片,在这里分子失去电子,生成带正电荷的分子离子。分子离子可进一步裂解生成质量更小的碎片离子。由于离子化所需要的能量随分子不同差异很大,因此,对于不同的分子应选择不同的离解方法。通常称能给样品较大能量的电离方法为硬电离方法,而给样品较小能量的电离方法为软电离方法,后一种方法适用于易破裂或易电离的样品。“软”是相对于最常用的电子电离EI而言。采用软电离技术容易获得能指明相对分子质量的准分子离子(M+H)+、(M-H)+,但能提供结构信息的碎片离子较少。