文档介绍：氨基酸和生物资源!!"#!!$%"%#$!)!$%!"#$%!&#’()*#%+#&,-(%./&-(收稿日期$!"#!’##’!(作者简介$刘腾飞"#)((’#!男!硕士生!现主要从事蛋白质相互作用的研究%*’+,-.$L:T.-<"#!&561+"通讯联系人!*’+,-.$.,394-,.-<"9+,-.561+基金项目$国家)B$重点基础研究发展计划"!"##G=)#"B"##&广东省高等学校高层次人才项目’!"##(%$#号&中央高校基本科研业务费专项资金"!#&")$#B&!#&##%$"&!#&#"#"##埃兹蛋白"!_.)*#及其突变体的原核表达与纯化刘腾飞!陈妙娟!高学娟!刘小会!刘朗夏""暨南大学生命与健康工程研究院!广东广州@#"&$!#摘要$F0P@&B位点磷酸化是:/P-3活化的必需条件%利用定点突变引物将F@&B突变为>或?!通过KG]扩增出相应的基因片段!将其通过F%连接酶连接至含E-7标签的原核表达载体U*F’!"T"‘#!构建了原核重组质粒U*F’!"T"‘#’*/RF!U*F’!"T"‘#’*/F@&B>和U*F’!"T"‘#’*/F@&B?%转化表达宿主大肠杆菌]177:Q,后!用异丙基’!’硫代半乳糖诱导重组蛋白的表达%重组蛋白经亲和镍柱纯化以后!应用V:7Q:%*/P-3野生型及其组成型激活和显性负突变质粒的成功构建及其目的蛋白E-7’*/RF!E-7’*/******@B&>和E-7’*/******@B&?的成功表达纯化!为更深入地研究:/P-3生物学功能奠定基础%关键词$埃兹蛋白&野生型&组成型激活突变&显性负突变&融合蛋白表达与纯化中图分类号$gB(文献标识码$>文章编号$#""&’($B&"!"#!#"%’""!)’"&P.&;1.,&%)$!/8.#99)&*1*-P4.)")$1%)&*&"!_.)*1*-H%9’4%1*%9EHC?#*3"#)!:+!@’)1&^41*!70=A4#^41*!EHCA)1&(4)!EHCE1*3/)1""X37Q-Q<Q:1LC-L:,3;E:,.Q0*39-3::P-39!M-3,3N3-O:P7-Q2!H<,39/01<@#"&$!!H<,39;139!G0-3,#!!0I9%.1$%$F0:U017U01P2.,Q-131LQ0P:13-3:@&B-7P:h<-P:;L1PQ0:,6Q-O,Q-131L:/P-35F@&B>+<Q,3Q,3;F@&B?+<Q,3QV:P:9:3:P,Q:;<7-39+<Q,3QUP-+:P75H:3:7V:P:,+U.-L-:;+:P,7:60,-3P:,6Q-13"KG]#!,3;:;-3Q1Q0::4UP:77-13O:6Q1PU*F’!"T"‘#613Q,-3-39E-7Q,9Q16137QP<6QQ0:P:61+T-3,3QU.,7+-;7U*F’!"T"‘#’*/RF!U*F’!"T"‘#’*/F@&B>,3;U*F’!"T"‘#’*/F@&B?5F0:P:61+T-3,3QU.,7+-;7V:P:QP,37L1P+:;-3Q1FC&%:#]177:Q,Q1:4UP:77Q0:L<7-13UP1Q:-37,LQ:P-3;<6Q-13V-Q0X71UP1U2.’!’1’#’Q0-19,