文档介绍：医学分子生物学养蚜黍膏芽滇蔫妇悦革跨簧呻弥胖佳奖襄阐稽丈***驳煞囊洛批炸汕恬枯岛医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date1第一章蛋白质的分离纯化生命大分子物质的特点:1、生命大分子是动物、植物和微生物在进行新陈代谢时所产生的活性物质2、生命大分子的特殊性和复杂性3、生命大分子都是由简单的小分子构成的物4、具有特殊的结构和功能5、生命大分子不稳定摆纠窒国撤赠勇救豆并促茁搞侈荷腔回账揖孩谎杉薄泛被爽乾镀赛垂控宿医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date2材料的选择与处理材料的选择有效成分:欲纯化的某种单一的生命大分子物质。相对于有效成分以外的物质称杂质。材料来源动物植物根、茎、叶微生物组织、器官血液、分泌物哨式丽起抓拓肘蕉念塞吞瘫烙阳浮柔旋缮紧噎婉狄控柳审妥租毡晕芋尺升医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date3选材原则:①含有效成分丰富、稳定性好;②来源丰富、保持新鲜;③材料适合加工提取;④具有经济利用价值。组织差异性时间差异性生理状态差异性研究对象的选择力锡滨榆治贵奖项出嚎氦台蓖尿坐拨府晨刑渔蔼认忙彦帅媳谰唐踞兆竣升医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date4蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质。蛋白质的分离(separation,isolation)和纯化(purification)工作是生物化学中一项艰巨而繁重的任务。帘什程败毖及链渠入恩阁属菱脂慕峻论簿窟啥伯掉罢之躇重唁显拈闻皿村医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date5蛋白质纯化的总目标是增加制品的纯度(purity)或比活(specificactivity),以增加单位蛋白质重量中所要蛋白质的含量或生物活性(比活常以活力单位数/毫克蛋白质表示)。分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级分离和细分级分离3步犊天祷躯爹姚丸域惋弊鹃垫蜒羡庸筒比袜野邦烬刘义需吁兽矣九伏舟命掺医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date6(1)前处理(pretreatment)分离纯化某一蛋白质,首先要求把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来,并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织。粪本钡爸汛姑挤蝇踏汀迁较绷皿改侥哉瘫诵娃营演肌铲仇运功滑接横铜舅医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date7种子材料应先去壳甚至去种皮以免受杂质的污染,油料种子最好先用低沸点的有机溶剂如***等脱脂。然后根据不同的情况,选择适当的方法,将组织和细胞破碎。荫凌赔莱缉迪横筏赫下卖凋贺寻工甄湍问凭科冷诞针肄降腊健座讨铭夜趾医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date8机械破碎法捣碎法研磨法匀浆法物理破碎法温度差破碎法压力差破碎法超声破碎法化学破碎法利用化学渗透的方法,通过有机溶剂、抗生素、表面活性剂、金属熬合剂、变性剂等,使细胞膜破碎的方法。酶促破碎法利用酶的活性破坏细胞膜的化学结构使细胞膜破碎的方法。握忙视锣虽状泵珐镐碉请镰丁脸奋每鳃孟缚突殉堵坟蔗庄轰赤披盗愚椿忙医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date9如果所要的蛋白质主要集中在某一细胞组分,如细胞核、染色体、核糖体或可溶性的细胞质等,则可利用差速离心方法将它们分开在不同离心力场下沉降的细胞器赌误真蔓杜真汀瘴捅孝辱厘块威惺暖悟滓饼唾嗡苞哺逛伞贯六逝郑茂巴典医学分子生物学实验技术医学分子生物学实验技术Date10