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ImageLab凝胶成像系统操作手册.doc

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ImageLab凝胶成像系统操作手册.doc

上传人:q1188830 2019/12/19 文件大小:1.59 MB

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ImageLab凝胶成像系统操作手册.doc

文档介绍

文档介绍:ImageLab中文操作手册™FastandReliableImageLab全自动图像获取和分析软件用于MolecularImagerChemiDoc™XRS+、MolecularImagerGelDoc™XR+和CriterionStainFreeTM成像系统,可应用于凝胶电泳和转印膜的数字成像和分析,而自动化的工作流程能加速图像获取步骤及参数优化,并针对调整好的凝胶或转印膜影像进行系统性分析,进而得到所需的分析数据结果。一、(1)图像工具(ImageTools)(2)泳道及条带工具(LaneandBandTools)(3)分子量工具(MWMolecularWeight)(4)自动定量工具(QuantityTools)(5)注释工具(AnnotationTools)(6)手动定量工具(VolumeTools)二、:在凝胶成像(GelImaging)对话框中选择Chemi(化学发光)应用程序(1)在成像区域(ImagingArea)对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小(非必需,可之后通过PositionGel选择)(2)选择成像曝光(ImageExposure)方法,可以人为评估曝光时间并以手动设定(ManualExposure),或是使用信号累积模式(umulationMode,SAM)来进行操作。在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定,因为您想获得一个充分利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被识别;过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和(也就是说,超出了相机准确报告信号的能力)。如果这是您第一次用ChemiDocXRS+分析化学发光样品,您需要在使用手控或信号累积模式(SAM)之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取得一个相对短的手工曝光并利用ImageLab里的工具估计最适的曝光时间。(1)选择手动设定曝光时间(Manuallysetexposuretime)并在读秒框中输入10秒。(2)选择Highlightsaturatedpixels。(3)把胶置于透射箱的中心位置。(4)在程序窗口中点击按钮。(5)观察显示器中样品的实时图像,打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区域。(6)可利用照相机的变焦滑板小。(7)选择按钮获得你的第一个图像。调节成像区域的大若所需的图像出现在计算机的显示器上,确认图像中是否包含红色的饱和区域。若有饱和区域存在,请重新以较短的曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在,则可移动鼠标置于最暗的条带之上,在较低的右下角ImageLab窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强度为1994,照相机能记录的最大值的32分之一(最大值为65,535)。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相机的最大动态范围附近成像你的样品。若你只需针对单一图像的成像时间进行评估,可直接在手动曝光区域中输入300。(umulationMode,SAM)如果预估方法不足以精确满足您的目的,请选择SAM按钮,然后按Setup按钮。一个新的对话框会跳出来,其包含有可输入细分的成像时间的领域。在这个例子中,我们已经输入了小于和大于我们原始的300秒曝光估计时间,因为我们有理由相信准确的成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要5个成像,推测其中一个将会与最佳成像极为接近。一个您的SAM设定的图像显示出现在对话框里。而SAM设定的影像显示对话窗口,在您选择按钮后再点选按钮,窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在250秒获取第一个图像,同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方,以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。就像前面做过的那样,通过移动鼠标在图像上,您能判定强度值。您也可以通过使用位于程序窗口左边的图像转换窗口(ImageTransform)中的调节划片改变图像的表观。在SAM程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求的图像时,点击按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在SAM获取图像的过程中或之后来保存需要的所有图像,直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存盘保留下来。在决定获取图像的数量时,记住增加SAM图像会导致背景信号的平均。当较多的图像被获得时,在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信号很重要,我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。三、建立全自动图像获取及分析程序(CreatingProt