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基因工程酶法生产谷胱甘肽的工艺研究劳兴珍,宋斌,肖开芳,郑珩泄┛拼笱蒲в爰际跹г海漳暇谷胱甘肽还劝滨R籐一半胱氨酰一甘氨酸,是真核细胞中最丰富的小肽类巯基化合物组成部分,广泛分布在各种组织中¨I锾迥诔过%的谷胱甘肽以还原态形式存在,而氧化态谷胱甘肽也可以在谷胱甘肽还原酶的作用下被还原成蒵。谷胱甘肽参与体内许多重要生理学反应,是重要的抗氧化剂、免疫促进剂、⑹称妨煊蛴泄惴河τ谩D壳肮胱甘肽的生产方法主要集中在发酵法和酶法生产【9入赘孰目梢栽谒娜职被崆疤谷氨酸,话腚装彼幔拾彼及嬖诘那榭下用酶法进行生产。另外,谷胱甘肽也可以通过发酵法用啤酒酵母菌及念珠菌等来作为工业用菌生产谷胱甘肽∞,。随着基因工程的发展,,并在宿主菌中过量表达,然后利用过表达的重组酶的活性来合成谷胱甘肽。本研究利用基因工程的方法得到两个分别含有及基因的大肠杆菌的基础上进行酶法合成谷胱甘肽,并对酶法生产械那疤灏被岬呐ǘ燃懊纠胱浓度等条件进行工艺摸索。瞧饔氩牧仪器高效液相色谱仪系列拦鶺司籆反相色谱柱:蘸喊羁萍加邢薰。。.约谷胱甘肽标准品,上海生工;酵母粉,安琪酵母股份有限公司;其他皆为国产分析纯。.嘌培养基/~:葡萄糖,酵母粉,蛋白胨椒还劝彼崤ǘ榷訥产量的影响分别称取两株重组菌菌体各煨的反应液中。反应液成分一般包括狦~。改变反应液中的还劝彼崤ǘ榷渌跫槐淅纯疾霯一谷氨酸浓度对酶法生产谷胱甘肽的影响。还劝彼崤度分别设计为,,,,体系中反应,。~,反应每⊙进行检测,检测条件是:流动相为乙腈:水为还潭ㄏ辔狢反相色谱柱×;流速为/唤课;检测波长为;柱压为;柱温为话腚装彼崤ǘ榷訥产量的影响话腚装彼崤ǘ仍诠入赘孰牡纳锖铣芍芯摘要:研究了前体氨基酸和辅因子对基因工程酶法生产谷胱甘肽挠跋臁J笛榭疾炝瞬煌ǘ鹊那疤灏被岷不同的镁离子浓度对于重组大肠杆菌酶法生产康谋浠J笛榻峁砻鳎盠—·为酶法生产谷胱甘肽的最佳前体氨基酸和辅因子添加浓度。关键词:基因工程;谷胱甘肽;酶法;工艺中图分类号:文献标识码:文章编号:—一—.膅—.℃。氨基酸和生物资源,池如.×收稿日期:—一作者简介:劳兴珍。女彩Γ邮挛⑸镉肷┭а芯浚珽·通讯作者猰簔畉,·ǎ籐—·;狢·ǎ籑。·ǎ籄·ǎ·ā埃./·ǎ籊·ǎ籐—~;—:.
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需要添加“,故设计为改变反应液中浓度有反馈抑制作用,适量的话腚装彼峥梢允狗从进行完全,但同时过高浓度的话腚装彼峄嵋种反应的进行,所以要确定话腚装彼岬淖罴雅ǘ条件。实验设计话腚装彼崤ǘ确直鹞,体系中反应,℃,~,反应每⊙检测。甘氨酸浓度对康挠跋改变反应液中甘氨酸浓度而其他条件不变,甘氨酸浓度分别为,,,,体系中反应,℃,ǎ从γ样,进行检测。“浓度对康挠跋还劝滨0腚装彼岷铣擅讣肮入赘孰暮铣擅的活性中心需要“充当辅因子,所以在反应液中而其他条件不变,“浓度分别为,,体系中反应,℃,⊙蠬觳狻利用正交设计实验综合考察多因素对生产谷胱甘肽的影响在上述单因素实验大概确定了各个因素的最适值之后,设计四因素三水平的正交表来综合考察各因素对生成谷胱甘肽的贡献。还劝彼崤ǘ榷悦阜ㄉ入赘孰牡挠跋克鍸一谷氨酸浓度梯度变化如图从图梢钥闯鯨一谷氨酸浓度从·到·时,