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·鲁延迅,郑珩’,周俊素为例,瑀拢蛞蛩氐乃酱胛R慌拢泄┛拼笱蒲в爰际跹г海漳暇谷胱甘肽,是由还劝彼帷话腚装彼岷透拾彼崴峋募鹾隙傻囊恢志有还劝滨;哇匣幕钚匀模行矶嘀匾5功能,如解毒、护肝、清除自由基、维持细胞内适宜的氧化还原环境、调节细胞功能等,在医药、食品和保健品行业有广阔的应用前景¨’球面对称设计∞窃谇蛎嫔杓频幕∩希笛点分布在球面各卦限内的中心点和球面与坐标轴的交点上,而球心作为中心对照点的一种实验设计。在球面对称设计中,球面所在空间的维数等于试验因素的个数,球半径是因素个数的平方根,各实验点的坐标就是对应因素的水平,因此,实验点坐标有一,,个,即各因素有鏊剑笛次数为,其中R蛩馗鍪贘。以一,。球面对称设计的优点是实验次数与正交相当,但实验精度高,并且由此得到的关系式可以确定任何范围内的实验点的预测值,对于需要控制指标和多指标的实验,效果尤为显著。,因此已广泛应用于药物制剂配方优化口⒎⒔吞跫呕轏、药物提取工艺优化等‘煊颉前文我们报道了应用—设计和球面对称设计优化酵母发酵培养基,使酵母发酵菌量大幅度地提高从而提高谷胱甘肽的产量伸细胞内柿糠质疵挥刑岣摺R虼吮疚脑诖基础上,通过高渗刺激改变酵母生长环境,加入铣伤枰5陌被岬孜铮⑹褂们蛎娑猿粕计方法优化了添加物的组合方案,提高了胞内生物合成量与总产量。牧茵株湍妇本实验室筛选保藏材料与试剂谷胱甘肽对照品、四氧嘧啶购自上海生工,其它试剂均为国产分析纯。÷砹迨淳蝗テで谐小块,加水煮沸床脊耍偌悠萄糖颓碇浞秩芙夂蠓肿笆怨埽渴管约葡萄糖,酵母膏,蛋白胨,.⒔团嘌痝·葡萄糖.,酵母膏.,半胱氨酸鞍纂,椒酵母茵的培养将斜面活化的菌种用接种环接人种子培养基。嘌炼允つ期,按%接种量转接至发酵培养基。⒔J占⒔鸵海离心谜袅笏逑聪赴俅卫胄模再次清洗细胞,再离心,称湿菌重。将湿菌适量稀释后均匀铺于培养皿中,在℃烘箱中处理频摘要:研究了提高细胞内谷胱甘肽质量分数的方法。谷胱甘肽的总产量与细胞的数量和细胞内谷胱甘肽质量分数有关,通过添加底物和刺激物可以促进谷胱甘肽生物合成,提高胞内谷胱甘肽的质量分数。实验考察了高渗刺激物与前体氨基酸对胞内谷胱甘肽质量分数的影响,并应用球面对称设计优化了实验条件,使得胞内谷胱甘肽质量分数达ィ看.·ǎ直鸨扔呕疤岣吡嗽%:高渗应激;球面对称设计;谷胱甘肽;啤酒酵母中图分类号:.文献标识码:文章编号:——一氨基酸和生物资源,收稿口期:—一作者简介:鲁延迅,男,微生物制药方向,在读硕士研究生ㄑ蹲髡逧—:.基金资助:国家大学生创新实验计划甤。琈琋,℃,,℃,
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因素—广了』学■了!!!T彝騩干菌重量。.入赘孰奶崛》椒采用体积分数%乙醇破细胞法:精确称取>澹糜三角瓶中,然后向其中加入体积分数%乙醇’竦一离心∩锨澹吹煤珿的提取液。.入赘孰暮坎舛ǚ椒ǎ篈试剂衍生化法引。.坎舛ǚ椒ǎ将发酵液于~,离心清,称湿菌重。将湿菌适量稀释后均匀铺于培养皿中,在℃烘箱中处理频酶删亓俊高渗刺激物挠跋欤精确称量,在发酵培养保蚺嘌逑抵一次性添加一定量源锏绞笛樗柚张ǘ取7酵液继续培养至总发酵时间罩埂=ǚ⒔鸵离心,取菌体破壁抽提,测定俊底物的影响:精确称量,在发酵保蚺嘌逑抵幸淮涡添加一定比例、一定总量的底物氨基酸,以达到实验所需终浓度。发酵液