文档介绍：(医学版)2012年5月第14卷第3期JournalofHebeiUnitedUniversity(HealthSciences)2012May,14(3)靶基因的证据。目前认为miRNA5端和靶基因的碱基互补配对对于miRNA发挥调控功能是最关键的。特别是miRNA的第28个核苷酸被称为“种子”序列,现在流行的很多靶位点预测程序都是以和这段序列互补匹配为原则进行搜索和预测的。目前,对于miRNA靶基因的研究,除了上面的2种方法之外,通过对靶基因中与miRNA的种子序列互补位点进行突变,构建含有靶基因3UTR区突变位点的报告基因载体,通过突变UTR和非突变UTR载体,分别与miRNAASO以及miRNA过表达载体共转染,从而逆向研究miRNA的靶位点,为我们提供了一种研究miRNA功能的有力工具。3种方法的结合,是目前确定miRNA与预测靶基因相互作用的最为可靠的方法。本实验利用DNA重组技术,(+)/pri—miR一210,并对其进行纯化,转染293细胞,实时定量PCR和Northernblot方法检测了转染后细胞内miR一210的高表达水平,为进一步研究miR一210的功能奠定良好的实验基础。参考文献[1]BerezikovE,Gu~evV,vandeBeltJ,[J].Cell,2005,120(1):21[2]XieX,LuJ,KulbokasEJ,—parisonofsereralmammals[J].Namre,2005,434(7031):338[3]:genomics,biogenesis,mechanism,andfunc-tion[J].Cell,2004,116(2):281『4]ChenC,RidzonDA,BroomerAj,—timequantificationofmicroRNAsbystem—loopRT—PCR[J].NucleicacidsreseaTch,2005,33(2o):179[5]LaoK,XuNL,YeungV,—PCRforthedetectionofmuhiplemiRNAspeciesinsmallsamples『J].munications,2006,343(1):85[6]LeeRC,FeinbaumRL,AmbrosV,~plementaritytolin一14[J].Cell,1993,75(5):843f7]AmbrosV,Barte1B,BartelDP,[J].RNA,2003,9(3):277[8]:ganomics,biogenesis,mechanism,andrune—tion[J].Cell,2004,lI6(2):281[9]