文档介绍：酶促反应动力学实验报告**********杨恩原实验目的::一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、pH及酶浓度恒定的条件下,底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。在一般情况下,当底物浓度很低时,酶促反应的速度(v)随底物浓度[S]的增加而迅速增加,但当底物浓度继续增加时,反应速度的增加率就比较小,当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度Vmax)。底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示(Michaelis-Menten方程)即:式中Vmax为最大反应速度,Km为米氏常数,[S]为底物浓度当v=Vmax/2时,则Km=[S],Km是酶的特征性常数,测定Km是研究酶的一种重要方法。但是在一般情况下,根据实验结果绘制成的是直角双曲线,难以准确求得Km和Vmax。若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-Burk方程),则此方程为直角方程,即:以1/V和1/[S]分别为横坐标和纵坐标。将各点连线,在横轴截距为-1/Km,据此可算出Km值。本实验以碱性磷酸酶为例,测定不同浓度底物时的酶活性,再根据1/v和1/[S]的倒数作图,计算出其Km值。二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性,甚至使酶完全丧失活性的物质,成为酶的抑制剂。酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大,但对酶促反映的最大速度Vmax值无影响。非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[S]与酶的结合,故其Km值不变,然而却能降低其最大速度Vmax。本实验选取Na2HPO4作为碱性磷酸酶的抑制物,确定其抑制作用属于哪种类型。实验步骤:实验一:,:,做酶促反应:,37℃水浴保温5分钟左右。,各管混匀后在37℃准确保温15分钟。,。%4-%铁***。,放置10分钟,以管1为对照,于波长510nm处比色。读取各管吸光度,做记录。(酶活性计算及Km值计算)实验计算:°C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位,从标准曲线查出释放的酚量(ug),以此计算处各管的酶活性(v)。、1/S为横坐标,在坐标纸上作图,求出酶的Km值。Y=+,Km=:,:,做酶促反应:,37℃水浴保温5分钟左右。,各管混匀后在37℃准确保温15分钟。,。%4-%铁***。,放置10分钟,以管1为对照,于波长510nm处比色。读取各管吸光度,并计算各管酶活性。实验计算:以酶活性单位(v)的倒数1/