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紫外分光光度法检测溶氧对发酵的影响①光谱实验室楚生辉徐慧武实验郝分胡淑平②于晓敏于平野潘晓军引言成、培养温度、、比生长速率、溶氧以及营养物的流加等,其中氧在生物反应器中对菌体的生长、产物的形成、维持细胞的代谢具重要作用,在各影响因素中,溶氧量对蛋白表达量的影响突第卷,第月碱性成纤维细胞生长因子具促细胞增殖分化功能,并参与胚胎发育、血管生成、损伤修复、神经再生等多项生理及病理过程#俅采现饕S糜诖瓷舜疵妗⑸窬鹕恕⒅蟹锖笠胖ⅰ⒊沾簟心肌缺血、心肌梗塞等疾病的治疗,有广泛的医疗价值。发酵过程中的影响因素有:培养基组怪晌猙⒔偷墓丶韵拗埔蛩豰。本文着重研究溶氧对发酵的影响,借此指导生产,优化生产工艺。材料与仪器工程菌,携带可表达重组人碱性成纤维生长因子的质粒,带氨苄青霉素剐员昙牵晌轮菀窖г荷镆┢分惺曰乇4妗培养基组成:酵母粉、蛋白胨治龃、纯化水。;发酵罐中主培养基成分:硫酸钠、硫酸铵、氯化铵、七水硫酸镁治龃;发酵培养基用磷酸盐:三水磷酸氢二钾、十二水磷酸氢二钠治龃。要探索溶氧对碱性成纤维细胞生长因子响及其控制方法。采用补料分批发酵,在不同溶氧控制方式下,紫外分光光度法测定蛋白质浓度和氧对发酵表达有重要影响,优化溶氧条件有利于改进生产工艺从而节约成本和提高产量。.,⒔凸痰挠发酵液中菌体的产量,考察发酵过程中溶氧对表达的影响。结果表明控制溶氧为%,薹⒔/琤疞,与其他溶氧组比较产量显著增高,由此建立了最佳溶氧条件。溶关键词碱性成纤维细胞生长因子;补料分批发酵;溶氧中图分类号:.文献标识码:文章编号:.—琋轮菀窖г阂┭г赫憬∥轮菔胁枭礁呓淘扒行谋甭号①温州医学院科研课题项目基因工程菌实验室发酵纯化工艺研究②:;电话:;传真籈畁作者简介:胡淑平。,。收稿日期:··;接受日期:——一
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C鹁崾螅淙粗雍胮缂ǎ珼缂ǎ驳缤罚跗涌凇W急负弥肿雍螅结果与讨论发酵培养基用郝然啤⑵咚蛩嵝俊⒁凰蛩崦獭⒍叶囊宜岫啤⒘然二水硫酸钙、六水氯化钴。实验所用试剂均为分析纯。实验用水为纯化水。—接眯统还ぷ魈北京东联哈尔仪器制造有限公司狢痛笕萘亢阄抡荡器蟛质惺笛樯璞赋;土⑹。全自动发酵罐虾1P松锷璞腹こ逃邢薰、一型双束紫外分光光度计本┢瘴鐾ㄓ靡瞧饔邢拊鹑喂;吐莞丝掌顾趸词⑹‘视投炒婢支,以/接种于培养基中,痬振荡培养琌值达到—后进行扩增。把筛选的表达量较高的菌种接种于培养基的三脚瓶中,用层纱布盖好瓶口,在。阄乱〈仓校痳嘌5盇荡锏..保丫旱谷肆硪蛔坝培养基的三角瓶中,用层纱布盖好瓶口,在。阄乱〈仓校痬培养。当∞值达到—,准备上罐。蚿幕撼逡旱魇院胮岫燃啤S帽ズ臀匏橇蛩崮频魇院肈缂ā7人发酵主培养基、磷酸盐溶液和炕又。,加逝莸校℃高温罐体灭菌奚辖衎⒔停苎醯缂ú舛ㄈ苎酰直鹨种方式供氧ト苎酰虎ト苎酰③%溶氧;④%溶氧;⑤%溶氧J挤⒔发酵过程中每隔一定时间取样进行各项参数测定,观测菌体生长情况:吸取样品菌液,用水稀释一定倍数,以水作为空白对照,采用分光光度计于獬滩舛∣!?А⒕导。调发酵罐的温度至。琾滴,往发酵罐中加入蠼ň旱谷敕⒔凸蕖T诤阄隆⒑鉷嘌螅尤氩沽弦%葡萄糖溶液,流速/齇!P簟