文档介绍：植物二磷酸核***糖羧化酶(RuBPCase)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。96T检测范围:5U/ml-180U/ml使用目的本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中植物二磷酸核***糖羧化酶(RuBPCase)活性。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物RuBPCase水平。用纯化的RuBPCase抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入RuBPCase,再与HRP标记的RuBPCase抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化为蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品的RuBPCase呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物RuBPCase活性浓度。试剂盒组成标本要求1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性。操作步骤1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图标在小试管中进行稀释。2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30min。4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7、温育:操作同3。8、洗涤:操作同5。9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11、测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光值(OD值)。测定应在加终止液后15分钟内进行。操作程序总结准备试剂,样品和标准品→加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟→洗涤5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟→洗涤5次,加入显色液A、B,37℃反应10分钟→加入终止液→15分钟内读OD值→计算计算以标准物的浓度为坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值又标准曲线查出相应的