文档介绍：南方医科大学
硕士学位论文
鼻咽癌细胞株中CD133阳性细胞的分离与功能分析
姓名:邱际华
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:姚开泰
20090520
鼻咽癌细胞株粜韵赴分离与功能分析硕士研究生:邱际华师:姚开泰摘要导琋俏夜戏郊岸涎堑厍<的一种恶性肿瘤,尤以广东省珠江三角洲一带多见,故有“广东瘤啤>管鼻咽癌对放疗敏感,但由于鼻咽部淋巴组织丰富,易于早期转移,对化疗不敏感,转移及治疗后复发仍是鼻咽癌死亡的主要原因。因此,鼻咽癌发生发展,特别是鼻咽癌转移的机制仍是亟待解决的问题。然而即使同一克隆来源的肿瘤,也存在肿瘤细胞表型和功能的异质性,即肿瘤细胞存在增殖能力和分化能力的异质性。肿瘤干细胞学说认为肿瘤细胞内存在一群具有干细胞性质的细胞,具有自我更新及多向分化潜能,将这一部分细胞移植后能够重新形成肿瘤。肿瘤干细胞理论为肿瘤的起源提出了全新的阐述,肿瘤组织中存在极少量的细胞充当干细胞角色,它们具有自我更新和多向分化潜能,是肿瘤发生、发展、转移、复发、对抗放、化疗的根源,肿瘤干细胞学说也得到越来越多证据的支持。然而分离和纯化肿瘤干细胞,仍然是肿瘤干细胞研究的瓶颈问题。目前,鉴定肿瘤干细胞最权威的方法是确定肿瘤干细胞的特异细胞表面标志,并根据这些标志分离出肿瘤干细胞。近些年来,根据细胞表面特异性标志已经鉴定出了多种肿瘤的肿瘤干细胞。白血病干细胞是最早被发现的肿瘤干细胞,研究发现急性髓性白血病赴芯哂蠧。的细胞具有分化和增殖能力,注射入疭⑹螅艽俜⑷思毙运栊园籽2 是继硕士学位论文鼻咽癌
自我更新能力和分化能力,将少至鯟赴又值絅,∈竽宰之后新发现的又一重要的造血干/祖细胞表面抗原标志。随后,魑R恢干细胞标记物在多种实体肿瘤,如肝癌、结肠癌、及谏亓龅戎琢鲋械玫街な担珻在实体瘤干细胞的研究中起着十分及复发有着密切的关系。戎な的灾琢鲋蠧赴邢灾脑鲋衬芰Α织就能形成肿瘤,传代后能够连续接种,而且在疭、鼠组织中形成肿瘤等将结肠癌组织巾的粜韵赴浦驳絅/小鼠肾被膜下,发现所有是一种可以穿透细胞膜与岷系娜玖希嗳,赴侵改承┫赴哂薪赴挠ü馊玖螲懦觯现为细胞核不着色或着色程度很低的特性,目前的研究认为表型的形成与岷献榧鞍譍亚家族成员有着最直接的关系。而利用该特性分离的细胞称为细胞。近年的大量研究指出干细胞或某些前体细胞具有的表型。目前,已经从许多人和动物模型的正常组织及肿瘤组织和肿瘤细胞系分离得到了细胞,并证实其具有干细胞特性。因此,利用表型也成为干细胞分离研究常用的方法。但是,随着研究的进一步深入,也有实验证明,不是所有的细胞都是干细胞,赴敫上赴湟泊嬖诓钜臁在鼻咽癌的研究中,鼻咽癌干细胞的存在已经得到证实,壤标记滞留细胞;等利用贜细胞株中分离出类似干细胞的侧群细胞,且认为可能是干细胞的标志物。魑I掀ず图叶正常及肿瘤干细胞的重要标志物,在多种肿瘤中已证实其与肿瘤的发生、发少,诒茄拾┫赴谋泶锴榭鋈绾危茄拾〤赴纳镅形S中文摘要脑肿瘤、肺癌和前列腺癌重要的作用,大量研究发现,肿瘤细胞与肿瘤发生、侵袭、转移、耐药与患者原发肿瘤表型相同;赴啻颕个细胞不能形成肿瘤。结肠癌际荂阳性细胞而那些跣韵赴挥兄铝鲂浴琇证实鼻咽粘膜基底部有散在的展、复发、转移与耐药密切相关。但是,氡茄拾┑墓叵的壳盎怪V
O赴泻尾煌约氨茄拾┫赴鸆与表型之间的关系,目前尚不清楚。因此,探讨鼻咽癌发病与转移的机制,为鼻咽癌临床治疗提供新的靶向治疗的靶点,对提高鼻咽癌患者的生存率有实际意义。为此本课题进行了如下研究:昧魇较赴羌觳獠⒎掷氤霰茄拾┫赴曛械腃隒。细胞,激光共聚焦及流式细胞术检测分选纯度,然后通过体外实验比较细胞与O赴晕腋隆⒃鲋场⒎只⑶。方法魇较赴羌觳獗茄拾┫赴闏的表达利用流式细胞术检测诒茄拾┫。利用流式细胞仪根据细胞表面标志物分选出与O赴式细胞仪以及激光共聚焦技术对所分选的细胞进行纯度鉴定通过体外觳夥ā⑵桨蹇寺⌒纬墒笛楸冉螩隒。细胞的体分化潜能的测定:分选出来的细胞进行体外培养,培养的过程中利用流式细胞仪与激光共聚焦技术检测细胞比例的变化。魇较赴欠治鯟赴隨赴墓叵流式细胞仪检测诒茄拾┫赴曛斜泶硕士学位论文赴姆盅∮氪慷燃瓹赴镅Чδ芊治外自我更新与增殖能力。逋馇ㄒ剖匝榧盎凼匝榉治鯟隒。细胞的迁移能力。结果
采用流式细胞术检测了、,等直茄拾┫赴中谋泶锴榭觯种细胞株中暮慷己愣ㄔ.%。细胞的分离及纯度鉴定以细胞株作为研究对象,利用流式细胞仪分选出与细胞,利用激光共聚焦及流式细胞仪检测所分选的细胞的纯度,两者结果显示所分选的细胞纯度达到%以上,这为进一步研究其生物学功能奠定了细胞生物学功能的鉴定流式细胞仪分选出与O赴逋馐笛榧觳馄湓鲋场⑶ㄒ朴敕化潜能:捎肕法与平板克隆形成试验检测细胞的体外增殖情况,