流式细胞术检测细胞周期.doc

文档介绍：流式细胞术检测细胞周期(PI染色)操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm,5min,弃上清液。2、加入PBS1ml离心洗涤1次,弃上清。3、加入2ml预冷的70%酒精,4℃固定30min,或是-20℃固定过夜。4、离心,弃上清液。5、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。6、加入RNaseA(工作浓度20ug/ml)于500ul1×PBS中,37℃孵育30min,离心。7、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。8、加入PI(工作浓度50ug/ml)于500ul1×PBS中,室温避光孵育30min。9、混匀,过300目筛网,置流式管中,4℃冰箱保存,待测。10、用流式细胞仪检测细胞周期11、用Flowjo软件分析流式细胞仪检测数据,并导出细胞周期分析结果备注: 1、RNaseA:贮液浓度:1mg/ml;工作液配制:加1mg/ml贮液10ul于500ul1×PBS中,使终浓度为20ug/ml。2、PI:贮液浓度:;工作液配制:×PBS中,使终浓度为50ug/ml。4、检测样品细胞浓度1x106/ml。