文档介绍：山西医科大学
博士学位论文
肝癌缺失基因-1在多发性骨髓瘤中的作用及甲基化研究
姓名:王梅芳
申请学位级别:博士
专业:内科血液病学
指导教师:杨林花
2011-03-17
山西医科大学博士学位论文
中文摘要
多发性骨髓瘤(Multiple myeloma, MM)是浆细胞异常增生的恶性肿瘤。其特征为骨髓浆细
胞瘤和一株完整性的单克隆免疫球蛋白(IgG,IgA,IgD 或 IgE)或 Bence Jones 蛋白质(游离的
单克隆性κ或γ轻链)过度增生,临床常伴有多发性溶骨性损害,高钙血症,贫血,肾脏损害,
易感染等特点。MM 发病机制复杂,研究表明遗传学、免疫、细胞因子均与其发生、发展相
关。表观遗传学是近年来受到医学研究者关注的肿瘤研究热点。肿瘤抑癌基因(Tumor
suppressor gene, TSG)启动子区 CpG 岛超甲基化使之转录沉默在肿瘤的发生发展中起着重要
作用。肝癌缺失基因-1(Deleted in liver cancer 1, DLC-1)是 1998 年 Yuan[1]等在多个肝癌细胞系
研究中新发现的 TSG。甲基化特异性聚合酶链反应(Meathylation special PCR, MS-PCR)研究表
明,多种实体瘤中包括肝癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、食管癌、前列腺癌、鼻咽癌、乳腺癌、
宫颈癌、卵巢癌、肾癌、神经胶质瘤[2]等存在 DLC-1 CpG 岛异常甲基化,且是其表达降低或
缺失的主要机制。多种实体瘤肾透明细胞癌[3, 4]、卵巢上皮癌[5]、肝癌[6, 7]患者血清或癌组织
DLC-1 表达及临床意义研究结果显示 DLC-1 与癌症的发生、浸润和转移密切相关。在血液肿
瘤中已被证实在急性淋巴细胞性白血病(Acute lymphoblast lecumia, ALL)和非霍奇金淋巴瘤
(Non-Hodgkin’s lymphomas, NHL)中其启动子区异常甲基化比例超过 80%[8-11]。对 NHL[12]、
MM[13]细胞株研究表明 DLC-1 在血液肿瘤中也发挥抑癌功能。但关于其在 MM 患者表达、甲
基化及其与临床特征的相关性研究,目前研究报道尚少。本研究分别以 MM 患者及骨髓瘤细
胞株 U266 为研究对象,对 DLC-1 在 MM 患者及 U266 细胞株的表达、甲基化及生物学功能
进行了系列研究,并构建其转录本 1 的 GFP 真核表达载体,为后期其在细胞中的定位、功能
及调节通路研究奠定了实验基础。

第一章 DLC-1 在 MM 中的表达及意义

目的:以初治 MM 患者为研究对象,分析 DLC-1 在 MM 患者中的表达,并结合临床特
征分析其临床意义,为 MM 临床诊断、治疗、预后判断提供思路及实验基础。
方法:根据 DLC-1 转录本 2 mRNA 设计特异性引物,运用实时荧光定量聚合酶链反应
(Real-time PCR, RT-PCR)技术,检测 DLC-1 在 MM 患者中的表达,并结合 MM 患者各临床指
标包括 HB、BUN、LDH、β2-MG、IgG、IgM、 KAP、LAM、ALB、Cr、骨髓浆细胞比例进
行相关分析,分析其临床意义。
结果:Real-time PCR 数据经溶解曲线结果及凝胶电泳验证为有效数据,MM 患者组△Ct
为 ±,与对照组 ± 比较,两者存在统计学差异,表明 MM 患者 DLC-1 表达降
低或缺失。进一步比较 MM 患者各分期、分级 DLC-1 表达,结果显示各组间 DLC-1 △Ct 值
无统计学差异,可能是病例样本量少,分型、分期数据呈偏态分布,缺乏 MGUS 或冒烟性
MM,大多数患者为 III 期,II 期病例仅 2 例,病例数不足以代表特征群体。DLC-1 表达与临
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床各种预后相关指标的相关分析显示,DLC-1 表达△Ct 值与 HB、BUN、LDH、β2-MG、IgG、
IgM、 KAP、LAM 相关性分析无统计学差异;而与血清 ALB 呈明显负相关(r=-, P=);
与 Cr(r=, P=)及骨髓浆细胞比例(r=, P=)呈明显正相关。而△Ct 值越高,表
明 DLC-1 表达越低。上述研究结果提示 DLC-1 表达降低可能在判断 MM 预后中具有一定意
义,尚需扩大样本进一步研究。
结论:DLC-1 在 MM 患者表达降低或缺失,MM 患者△Ct 值与血清 ALB 呈明显负相关
(r=-,P=);与 Cr(r=,P=