文档介绍：实验三微生物的分离、纯化与微生物的培养特征一、 实验目的(一)掌握几种分离、纯化微生物的基本操作技术。(-)了解不同微生物培养在斜面上和液体、固体培养基屮的特征。(三)进一步熟悉和常握微生物的无菌操作接种技术。二、 实验原理在自然界屮,微生物的种类很多,数量很大,为了获得单个菌体,首先必须把要分离的材料进行适汁的释放,按其生长所需要的条件,使其在平板上,由一个菌体繁殖成单个菌落,这样,就能从屮挑选出所需要的纯种。挑选出的菌种一般应分别接种到试管斜面上,然后,在平板丄反复进行分离培养,最后可获得纯种。微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和固体培养基来检验不同微牛物的培养特征。利用这些特征,可以作为它们的种类鉴定和识别纯培养是否污染的参考。三、 实验器材(一)土壤样品(-)培养基:牛肉膏蛋白腺琼脂培养基(三)用具无菌培养皿、无菌移液管、试管、无菌水、酒精灯、接种环、接种针、火柴、恒温箱、灭菌锅等。四、实验步骤细菌纯种分离的方法有两种:稀释平板法和平板划线法。(一)稀释平板涂布法取样用无菌锥形瓶到现场取一定量的土壤(或活性污泥或湖水),迅速带冋实验室。稀释土样称1克土样,在火焰旁加到有99mL无菌水和少许玻璃珠的三角烧瓶内,将瓶子依左右方向振荡数十次(或在振荡器上振荡分散),使土样与水充分混合,将菌分散,土样屮的菌被稀释了100倍,土壤悬液的稀释度为10-2o在火焰处打开无菌移液管的纸套(或用微量加样器装上无菌的塑料吸嘴),用无菌移液管吸取土壤悬液ImL,加到一个盛有9mL无菌水的试管内,稀释1000倍制成稀释度为10心的土壤悬液,将此移液管在试管内反复吹洗3次,然后取出,通过火焰,再插入纸套内,以备再用。轻轻摇动试管,使菌液均匀。再用刚才用过的移液管,插入试管内,反复吹洗3次,然后取出ImL菌液,加到另一支盛有9mL无菌水的试管屮,制成稀释度为10^的土壤悬液,反复吸吹3次,同法作一系列的稀释,得到10\IO6的土壤稀释液,稀释完后,由最小的稀释液(IO®)"的平板培养基屮,用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表而,再依次分别从10\10*,加到相应编号的培养皿内,每次吸取吋,移液管都要在稀释液屮反复吹洗几次。两个平行。平板培养基静置5min,倒置于30°C培养24〜48h后观察结果,检查菌苔是否单纯,也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物,若有其他杂菌混杂,就要再一次进行分离、纯化,直到获得纯培养。将待分离的材料进行】。*騒备细菌菌落出现在将与样品混匀后的营平板表面及内部养琼脂倒入无菌平血实验图・6稀释麻平板分离细菌单菌落(-)平板划线分离法划线在近火焰处,左手拿皿底,以屮指、无名指和小指托住皿底,拇指和食指夹住皿盖,靠近火焰,将皿盖掀半开,右手拿接种环,以无菌操作沾取少许待分离的材料,伸入培养皿内,在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)。划线的方法很多,但无论哪种方法划线,其戸的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使形成单个菌落。实验图・7平板划线分离法".