文档介绍：中国协和医科大学
硕士学位论文
Starburst PAMAM树状高分子作为新型非病毒人工DNA转运载体
的研究
姓名:郭晨莹
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:王恒
±里塑塑堕型盔堂堡主生堡壅————』堕塑墅量一中文摘要分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,其合成过程高度可控,可以通过“两步法”进行有序的合成反应而获得一系列抗体、治疗性遗传物质、荧光基团以及对比试剂等外来分子从而作为这些分子的转运载体应用于生物医学的各个领域。纬傻母春衔锟梢愿咝ёH九嘌恼婧讼赴⑶叶韵赴挥卸拘宰饔谩H欢分子在活体内的作用特性和规律目前却所知甚少。为了研究分子作为呙缫约爸瘟菩砸糯镏实脑怂驮靥逶诨钐逅肿游分子与南嗷プ饔锰匦浴⒏梅肿釉体内体外的作用规律以及毒性进行了初步的研究。实验表明,全代的珿珿珿皆可与纬筛春衔铩8春衔锖芪榷ǎ诮洗蟮腄玪仍不解离,提示复合物在细胞的胞质内过程中仍可能能较长受限制性内切酶的降解。在一定的电荷比范围内,代数越高的分子介导H鞠赴哪芰υ角浚珿肿咏榈糄转染细胞的阳性率可达%。在复合物溶液中加入一定浓度的—梢源蟠筇岣逷/淖H拘剩电荷比形成的效率约为%,与目前转染效率较高的商业化阳离子脂淖H拘氏未与春鲜保琩肿釉诮系团ǘ仁北硐殖隽艘欢ǖ亩拘裕挥胫啾龋活体实验显示,在肿拥慕榈枷拢庠绰躺ü獾鞍谆虮达序列的质粒狽梢栽贐痗小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉等各主不同代数膁肿印D壳昂铣傻膁肿佑蠴~代俏狦獹恳淮肿泳腥范ǖ拇笮⒎肿恿恳约澳┒税被拧分子由于其理想的球体结构以及大量的分子内部空穴而适宜结合在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与纬筛春衔铩O钟械难芯拷峁允綪的应用潜力,本实验以,.珿珿珿,等六代研究对象,对值变化范围时间地保持与春系淖刺可保护与之复合的肿用疍复合物转染当;在有效作用浓度范围内,/春衔锒韵赴薅拘裕ǖ蛟诨竦媒细咦H拘实耐北硐殖隽讼赴拘裕词乖诤艿偷嬖谑闭庵侄拘砸材鼙患觳獬隼础与
主里垃塑堕型奎堂堡主皇笙兰————————妓生一要组织器官中获得表达,并且在肾中的表达量高于其它各组织器官。说明肿拥慕榈枷拢鲇质粒庖連痚小鼠一次即可获得很高的免疫应答效应,比用同样量的裸质粒庖呤笛樾∈笏竦玫拿庖分子本身或者溶液中单个存在的刖后的直径达到一定范围时即可被生物体内的巨噬细胞识别和吞噬,引起整个生物体免疫调节的紊乱,同时,这些簇状复合物也难以顺利通过体内的其它各种生物屏障,大量滞留在体内的组织各处,引起肝脏、肾脏、脾脏等重要器官的急性病变、坏死,从当制备复合物的溶液中的ǘ冉系褪保纬傻母春衔锵嗷ブ洳⒉蝗易聚集,因而对生物体并无危害。但是随着溶液中ǘ鹊奶岣撸纬傻母春物在溶液中相互聚集成簇的趋势也逐渐增加。当溶液中呐ǘ却锏絣斗∥山时,溶液中的复合物相互之间容易聚集成簇,形成直径较大的不溶性颗粒,并且溶液中质粒某ざ仍酱螅纱睾蟾春衔锏闹本毒驮酱螅允笛樾∈蟮闹滤佬вυ角俊4与纬傻母春衔镌谌芤褐斜却细叩腜与纬傻母春衔锔菀拙奂1臼匝榻峁允荆跫掠柿与纬傻母春衔锟梢缘贾率笛樾∈蟮乃劳觯嗤闹纬傻母春衔锶次匆鸨幻庖咝∈蟮乃劳觯仓っ髁苏庖坏恪合物相互之间聚集成簇的趋势很小,对生物体无毒副作用,并且在分子介导下,仅需少量的质粒庖咭淮渭纯捎辗⒔细叩拿庖咝вΓ认嗤康质粒ザ烂庖呤笛樾∈笏辗⒌拿庖咝вΩ呒甘缴习俦丁R虼薖以其独特的性质,具有在活体内应用的潜力,有望作为一种新型的无毒、非病毒型怂驮靥澹贒疫苗和基因治疗领域发挥作用。疍复合物可以穿越生物体内包括网状内皮系统和血一脑屏障在内的多种生物屏障而转染多种组织部位实现外源基因的表达。应答效应高几十到上百倍。复合物对生物体均无毒副作用。但是当溶液中的复合物之间相互聚集成簇,并且成簇而造成被免疫小鼠在短时间内的死亡。数较小的粒隚由于当我们将溶液中呐ǘ瓤刂圃.//以下时,溶液中所形成的复在
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⒏踩ā疫苗也是一种亚单位疫苗,在减毒疫苗所潜在的姐椿O铡舌入主要借助病毒载体、脂质体包被或与靶细胞特异眭亲和的蛋白质相结合等手段,用于遗传性疾病和肿瘤等的治疗。直到年·冉ǹ杀泶锴萘鞲胁《Ⅵ保护性抗原⒛苡盏糂和细胞免疫应答。裸庖吣苁够宥灾柿K嗦氲目乖苛叶⒍喔霾≡宓幕蚩梢宰霸谝桓鲋柿V校佣跎倭嗣庖呤弊⑸涞拇问发生插入突变的证据,但不能排除少数质粒迦氲饺旧迳希鸩迦胪槐涞目勺灾柬酢墙ū嗦肽持挚乖鞍椎耐庠椿鵌騌苯拥既动物体细胞内,并通过宿主细胞的表