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内蒙古医学院学报年旦堑鲞笙兰塑· ·
· 论著·
干扰对肝癌细胞增殖和蛋白质组的影响
王文礼, 刘婷
.内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室,内蒙古呼和浩特
摘要:目的:研究对细胞株表达的抑制及细胞生长的影响,并用双向凝胶电泳和质谱
技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质。方法:构建质粒表达载体一—,稳定转染肝癌
细胞株,获得一细胞系,—检测表达,测定细胞的增殖活性,
流式细胞仪检测细胞周期。裂解、抽提一细胞和,期肝癌细胞全蛋白,用双向电泳技
术进行分离后,用分析软件对两组细胞全蛋白质表达谱进行差异分析,并应用——和
数据库搜索鉴定差异显著的蛋白点。结果:一—细胞与转染空质粒细胞和未转染的
细胞相比,生长速度减慢,出现/。期细胞增多,/ 和期细胞减少。
细胞株平均检测到±:个蛋白点,一细胞±个,匹配分析,筛
选出两组间差异倍及以上且出现频率大于等于%的蛋白点个。应用质谱鉴定出角蛋白、波形蛋白、神经
多肽等个期细胞高表达蛋白点。结论:在细胞株中,导入—扰,可有效抑制
的表达,进而使细胞增殖减缓,逆转其恶性表型。两纽细胞蛋白质谱有明显差异,鉴定出期细胞
高表达蛋白点个,这些蛋白的高表达引起肿瘤的基因修饰异常、分化异常、增殖紊乱,肿瘤侵袭转移。
关键词:肝癌细胞; 干扰;;蛋白质组;一;质谱
中图分类号: 文献标识码: 文章编号:———
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收稿日期:——;修回日期:——
基金项目:
作者简介:王文礼一,男,内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室教授,硕士研究生导师。
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细胞周期蛋白,在~期与细胞因库中选定目的基因人类,依照的
周期依赖性蛋白激酶结合,促进细胞通过设计原则,利用在数据库查询,未发现
,/限制点而进入期⋯。目前有研究表明,—与另外任何基因同源。质粒一经
过表达将缩短期进程,导致细胞增殖失双酶切后和目的基因复性片段连接,转
控,促进细胞恶性转化和肿瘤发展。近年来迅化感受态细菌,抗性筛选,酶切鉴
速发展的蛋白质组学研究,能动态、整体、定量地考定,测序符合要求后提取质粒载体。命名为一
察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类、数量的变—。
化,是一种有效的高通量的研究模式。运用该.. 细胞培养及稳定转染细胞生长于含%
策略,本研究通过对基因表达抑制前后肝小牛血清的一培养基,置、%:混
癌细胞株全细胞蛋白质组表达差异分析, 合气体的孵培养箱中培养。实验分空白组、对照组
筛选出一些有潜在应用价值的差异蛋白质,并研究和实验组。空白组不经任何处理,对照组转染空质
了干扰对基因表达抑制对细粒载体/,实验组转染一,
胞株细胞周期和细胞增殖的影响。浓度为/,用脂质体转染试剂
进行转染