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免疫蛋白质组学技术筛选鉴定日本血吸虫雄虫诊断候选抗原,段础“,/国匾煎复堑堂笾鎏痘堂苤查垫堡眢眦唧塑逝筰蛔生墅型堕:妞垫:型:箜:№:縎睿籌籑·论著·/血细,沈啪琓目前我国已有几十种血吸虫病免疫诊断试剂,吸虫病防治中发挥了一定的作用АU庑┘觳夥椒特异性低等问题;此外,虫源性抗原的来源、成本不免疫蛋白质组学应用于肿瘤、自身免疫性疾病生物标志物筛选鉴定的研究报道较多【,但有关血吸虫免疫蛋白质组的研究相对较少M踉降萚痌刘晓龙王越马安施晓华朱明东汤益干小仙【摘要】目的应用经典的免疫蛋白质组技术筛选、鉴定本血吸虫雄虫抗原蛋白质。以期获得敏感【关键词】血吸虫,日本;免疫蛋白质组学;雄虫;,已在血均采用虫卵或成虫粗抗原,其成份复杂,普遍存在着可预测,质量也难以标准化。如何制备敏感、特异,并且质量均一、可批量获取、成本低廉的血吸虫病诊断抗原是几十年来一直有待解决的问题。应用免疫蛋白质组学技术已分别从日本血吸虫尾性高、特异性强的诊断抗原。方法从人工感染日本血吸虫的家兔门静脉中收集血吸虫雄性成虫,提取可溶蛋白;采用双向凝胶电泳与〖O嘟岷瓺〖筛选特异性抗原蛋白质点;V势准ǜ骺乖鞍字剩唤秆〕龅奶灞豢乖蛴肞扩增后插入到和靥迳希直鹩寐笈呶尴赴泶锾逑岛驮吮泶锵低郴竦弥刈榭乖琖印迹鉴定其抗原性。结果用籇〖9采秆〉鲅粜缘鞍字实悖渲龅阃币材苡虢】低醚G宸从Γ个特异性抗原蛋白质点经疶串联质谱鉴定,其中个%贜菘庹业狡ヅ涞白质数据资料。体被抗原均能在麦胚无细胞体系和原核表达体系中表达;免疫印迹显示麦胚无细胞体系表达的重组蛋白有较好抗原性,检测敏感性%,特异性ァ=崧刍谀旱缬镜拿庖叩鞍字首檠Ъ术用于诊断抗原筛选、鉴定切实可行;与甤吮泶锾逑迪啾龋笈呶尴赴泶锾逑当泶锏闹刈榈鞍具有较好的抗原性。痗珽簒甤縊甌瓽猙【,碅甅即/.痭%基金项目:浙江省科技厅专项公益技术攻关项目作者单位:杭州,浙江省医学科学院寄生虫病研究所通信作者:干小仙,:—甤痵琖琈,,甀.:,瓵瓺...,甌/.’甤甪ィ畐.—;....·/
万方数据
瓹舢垦隧逾堑疸堂篮鎏痘堂苤查垫生硭荟唧塑坐』坠ù远槎槎蛐垫:荆核№:嫌我铮’一℃毗~℃弓’一甀℃兀’;鎄、研’:膜均为猂公司产品。质谱仪蚴、童虫、虫卵可溶性蛋白质中筛选和鉴定了、、本文应用双向凝胶电泳一隬印迹相结合一〖、甌/势椎性蛋白质进行抗原筛选和鉴定,现将研究结果报道N嫜炯笆笛槎锢丛行区,由江西省寄生虫病防治研究所提供。健康月龄新西兰家兔褰嗉,体重~由浙江省实验动物中心提供,生产许可证号日本血吸虫病患者血清由江西省寄生虫病防治性;健康人阴性对照血清采自本单位职工,无血吸虫病流行区生活史,觳饪寡N婵固逡跣浴募彝茫跣酝醚G謇醋愿腥厩安⑶曳嗉斐卵阴性的健康家兔。笛槭约良耙瞧等电聚焦仪、垂直电泳仪、半干转印仪和为武汉博士德生物技术公司产品。限制性内切酶和连接酶为公司产品。无细胞表达试剂盒詍静贰V柿L崛∈约梁蠸鄢婵扇苄钥乖票孵育梦蘧吹雍笾媒嗑簧毡校邮柿康门静脉收集虫体。将合抱雌雄成虫分离,挑取雄虫冰浴上加细胞裂解液研磨成匀浆,超声处理看渭涓次。跫方法参照文献捎禾寤皿。等点聚焦设置程序:咝陨焖倬劢琼脂糖/溴酚蓝封胶条,凝胶用去离子水中漂洗巍C看瓮蓖跫块平行胶,其中榻河糜谧鞯缱S。块胶进行银染色及质谱鉴定。半干湿电转印煌谎鞠嗤跫碌缬尽⒆