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羰基还原酶产生菌纳秆∮氩柑跫呕舒学香,孙丽慧,郑裕国牧嫌敕椒工业微生物摘要:从采自全国各地的喾萃寥姥分校秆〉⒔团嘌基配方:葡萄糖疞,酵母提取粉酵培养条件:装液量摇瓶,接种量ィ跏紁,该茵在此条件下发酵培养疞,与优化前相比,,具有很好的立体选择性,%。关键词:氯一羟基丁酸乙酯;霍驶乖福一氯乙酰乙酸乙酯宦羟基丁酸乙酯甤,籆是一种重要的手性药物中间体,可用于合成他汀类药物一羟甲基戊二酰狢乖敢种萍羀渲萍亮⑵妥⑼蟹ニ「是美国第一个年销量超过一百亿美元的药物,目前也是全球最高销量的药物。另外,籆箍梢宰;,欢膺拎だ阻滞剂。因此,制备光学活性籆甘广泛关注。籆闹票阜椒ê芏啵蒙锎呋基不对称还原宦纫阴R宜嵋阴珻合成籆姆从哂性成本低、转化效率高、产物光学纯度高、反应条件温和等优点,因此成为国内外研究的热点【。而采用的生物催化剂既可以是提纯的酶,也可以是微生物细胞。由于生物还原需要价格昂贵的辅酶参与,因此,通常采用具备辅酶再生系统的微生物全细胞作为催化剂¨朝。本文采用底物诱导方法,从来自全国各地的喾萃寥姥分校秆〉玫揭恢旮呋钚浴⒏哐≡性羰基还原酶产生菌,对其进行生理生化及序列鉴定,确定该菌株为愿镁瓴柑跫辛擞呕@用畇生物催化合成瓹J状报道,该菌株具有严格的对映体选择性。本研究可为后续的基因工程菌的构建及酶分子结构改造奠定一定的基础,为实现生物合成瓹墓ひ祷生产提供理论指导。筛选所用土样分别来自于浙江、四川、云南和江苏等地喾萃寥姥罚坏孜顲一、标准品均购自上海百灵威化学技术有限公司;其他材料均为国产分析纯试剂。培养基富集培养基/:豆芽汁培养基孪驶贫寡咸烟,,自然。平板培养基和斜面培养基/:豆芽汁琼脂培养基孪驶贫寡,葡萄糖,琼脂匀种子培养基和初始发酵培养基/:葡萄糖痡..—...疞,.疞。最适发底物氯乙酰乙酸乙酯羰基还原酶酶活达到实验材料憬ひ荡笱锕こ萄芯克憬贾疞,第卷第年月盯疞,/甤.。基金项目:国家“奔苹手钅编号:作者简介:舒学香,女,河南信阳人。硕士研究生。ㄑ蹲髡撸褐T9淌冢琓:;猰簔甧.。#
万方数据
疌峁胩致舒学香等:羰基还原酶产生茵纳秆∮氩柑跫呕,酵母膏,将土壤样品配置成悬液并接种于富集培养基中,在℃、痬条件下培养至菌液浑浊。按サ慕又至浚扛凶=樱馗次。培养液经稀释涂布于平板培养基上,℃培养箱恒温培养羧〉ゾ渥=又列泵媾嘌希媾养至出现丰满菌体细胞后于姹2亍生理生化鉴定利用自动微生物鉴定系统,美国舛ā菌株的┰龊头治觯阂蕴崛〉的菌株细胞总D0澹直鹨訮’I舷掠我锒跃进行扩增¨,由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序,将测序得到的基因组序列在上进行比对。产酶条件优化为提高微生物产酶能力,首先分别考察培养基中碳源、氮源、磷源、金属离子等对产酶的影响,确定最佳的培养基组成。在此基础上,考察接种量、装液量、初始等对产酶的影响,确定最佳的产酶条件。静息细胞转化实验取在最佳产酶条件下培养好的发酵液离心收集菌体,并用生理盐水.%;;瓿珊笥玫忍寤宜嵋阴ポ取,无水:。干燥,气相色谱分析产物的生成量及光学纯度。.驶乖富盍Σ舛姆⒔。匏:。干燥,气相色谱分析产物的生