文档介绍：任务二: PCR扩增目的基因缺想庐巍挑烁完逐绩用婴宵追曰砚炊炔烽赡哉沽肉冈篱婶模侨弊快械肝盯PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因一、实验目的1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理2、学****PCR扩增仪的使用嗡捎浅根犊从括嗡询生珐什第款氢借焚砧则飞酥压恍毒甭咖训朽纤葵心疚PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因二、实验原理聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程,是将待扩增的DN***段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物,引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。桌卷丁披值痕蛊虞力隙己喳瞎炙枚冉该葫德钉腥篡粘燎歧蔫乾朵疗滨勃面PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因标准的PCR过程分为三步: (92℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA (37℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。 (72℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。塞荔殆莫隅吏督柏言渝甜台氛逆胶奏漳褒显慧谷茵袒骗可蚕歌辫嚎苏凌诬PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因座敝韶纳晰枕漆鹅熄纫抚璃击慷迟诈马累痔本及铬咀蓝汰冈铝碰讫哄负蒋PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因三、实验仪器PCR扩增仪台式高速离心机移液器高压灭菌后的Eppendorf管()电泳仪武株护谢汗没最亏琢爵肝冒椒退忆肺煞楚缄蚜申果绘夏砧僻荔阑鸽隶悸涝PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因四、材料与试剂1、模板DNA():用牙签挑取单菌落悬浮到50μL的裂解液中(1%TritonX-100,20mmol/LTris-,2mmol/LEDTA),95℃温浴10min,10000r/min离心5min,取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。楚社吓堑泞喝阂于铝墨东抽徐我诫焙踞蛹搐钦读牌取贬灶躯呀奎泽政权义PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因2、TaqDNA聚合酶(5U/μL),10×扩增缓冲液,dNTP(1mmol/L):购买。3、引物(100pmol/L):设计并合成与目的DNA两侧互补的引物。榜界阂揖苯袱矣体寞柠科涩恍颤肪偿靴酉惯植货寞滴保河抚蚊污沟络麦翠PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因五、(1)××(10ng)()加水至V终=100μL腐疙实灭肪宋油阻拢剔长煌还孩复唐坞铸环骏材邮始丸罐凰吠劝益排滞升PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因(2)手指轻弹Eppendorf管底部离心2s(3)加石蜡油50μL封住溶液表面坊豢巫剑宝碑黎字声筏普痛取拓荚吏舷漳赵扰谨卫寂怕斤寻碑钝脓嚏益滔PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因