文档介绍：山东农业大学
硕士学位论文
中国部分地区猪血清对甲型H1N1流感病毒的交叉免疫研究分析
姓名:高蕾
申请学位级别:硕士
专业:基础兽医学
指导教师:刘思当
2011-06-13
山东农业大学硕士学位论文
中文摘要
甲型 H1N1 流感病毒是一种新发生的全新“三重排”流感病毒,它在人群中的感染
导致了全球范围内的传播并造成了 21 世纪首次全球范围内的流感大流行。2009 年 5 月
至 11 月本次流感爆发后,全球数十个国家和地区陆续报道在猪体内分离到甲型 H1N1
流感病毒,而在此次流感爆发之前,从未在猪体内分离到该病毒。最近的研究证实甲型
H1N1 流感病毒可以感染猪并造成“猪-猪”的传播。而猪作为流感病毒的中间宿主,在
流感病毒的变异过程中充当了“混合器”的作用。而且目前在中国大陆地区还未有从猪
体内分离到甲型 H1N1 流感病毒的报道,也未知中国地区猪群对甲型 H1N1 流感病毒的
免疫水平。因此很有必要进行中方面的调查和研
究。
为了调查中国地区猪血清对甲型 H1N1 流感病毒是否存在交叉免疫,我们分别建立
了针对甲型 H1N1 流感病毒和 H1N1 亚型猪流感病毒目前流行株的抗体检测方法。首先
我们通过 PCR 分别扩增了 A/California/04/2009H1N1(甲型 H1N1 流感病毒)和
A/Swine/Shandong/1123/2008(H1N1)(H1N1 亚型猪流感病毒目前流行株)的 HA1 基因,
并克隆到表达载体 pET-30a(+)上。建立两个 pET - HA1 重组质粒(甲型 H1N1 流感病毒
和 H1N1 亚型猪流感病毒目前流行株),转化宿主菌 BL21 (DE3),经 IPTG 诱导,表达
重组蛋白。通过镍柱亲和层析获得纯化的重组蛋白。然后,以重组蛋白作为检测抗原,
分别建立了检测甲型 H1N1 流感病毒抗体和 H1N1 亚型猪流感病毒目前流行株抗体的间
接 ELISA 方法,并用该方法检测了搜集到的 785 份猪血清和 143 份甲流患者血清。
随后我们用统计学软件 SPSS 对两种 ELISA 检测结果作了相关性分析,表明 H1N1
亚型猪流感病毒 HA1 - ELISA 抗体检测结果与甲型 H1N1 流感病毒 HA1 - ELISA 抗体检
测结果呈显著的线性正相关。这种关系说明猪流感病毒 H1N1 亚型抗体阳性的猪血清存
在对甲型 H1N1 流感病毒的交叉免疫反应,而甲流患者血清中也存在对猪流感病毒 H1N1
亚型的交叉免疫反应,显示中国部分地区猪血清对甲型 H1N1 流感病毒存在交叉免疫。
结合序列比对的结果,我们分析产生这种交叉免疫的原因可能是甲型 H1N1 流感病毒与
H1N1 亚型猪流感病毒目前流行株之间存在交叉免疫表位。
本研究通过对中国部分地区猪血清对甲型H1N1流感病毒的交叉免疫情况进行了血
清学调查分析,研究结果丰富了我国甲型H1N1流感病毒流行病学调查内容,同时提示
我们要加强对猪流感的防控和检测。
关键词:交叉免疫;甲型 H1N1 流感病毒;H1N1 亚型猪流感病毒目前流行株;ELISA
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中国部分地区猪血清对甲型 H1N1 流感病毒的交叉免疫研究分析
Swine Serologic Cross-Reactivity with Pandemic (H1N1) 2009
Influenza Virus, in parts of china
Abstract
The pandemic (H1N1) 2009 influenza virus is a new triple swine-origin reassortant that
has caused globally human to human transmission and developed into the first influenza
pandemic of the twenty-first century. This specific reassortant had never been found in swine
when it was first detected in humans. However, after the outbreak of pandemic influenza
H1N1 2009 in human, the pandemic (H1N1) 2009 virus was isolated from swine in more than
ten countries during M