文档介绍：分类号 S828 学校代码 10129
U D C 学号 2009201050
tPA-PAI-1 系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的表达
Expression of Tissue-Type Plasminogen Activator-Plasminogen
Activator Inhibitor-1 System in Bovine Cumulus-Oocytes
during in vitro Maturation

申请人:关洪敏
学科门类:农学
学科专业:基础兽医学
研究方向:动物组织胚胎与发育生物学
指导教师:曹贵方教授
李海军副教授

论文提交日期:二〇一二年六月
摘要

为了初步了解组织型纤溶酶原激活剂(tissue-plasminogen activator,tPA)、
1 型纤溶酶原激活剂抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和纤溶
酶原(plasminogen,PLG)在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的潜在作用;本
文运用实时定量 RT-PCR 技术分别检测体外成熟过程中不同时间段(0 h、8 h、16 h、
24 h)、添加不同浓度卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)以及卵泡
刺激素受体结合抑制剂(follicle-stimulating hormone receptor-binding
inhibitor,FRBI-10)成熟培养 16 h 后牛卵丘细胞和卵母细胞中 tPA、PAI-1 及 PLG
基因相对表达变化,观察添加不同浓度 FSH 成熟培养 16 h 后卵丘细胞膨胀程度差异,
并统计卵母细胞第一极体排出情况。
1. 卵丘卵母细胞复合体在体外成熟过程中,卵丘细胞和卵母细胞 tPA mRNA 相
对表达量,于体外成熟 16 h 显著高于 0 h 和 8 h,24 h 达到最高(P<);而卵丘
细胞 PAI-1mRNA 相对表达量于 8 h 达到最高,显著高于 16 h 和 24 h(P<)。卵
丘细胞 PLG mRNA 相对表达量总体趋势和 tPA 类似,于 16 h 显著高于 0 h 和 8 h,
在 24 h 达到最高(P<)。卵母细胞 PAI-1 mRNA 相对表达量于 16 h 显著高于 0 h
和 8 h,达到最高,并显著高于 24 h(P<)。
2. 在添加不同浓度 FSH (0、、和 1 IU/mL)体外成熟 16 h 的各处理组,
卵丘细胞中 tPA mRNA 相对表达量随 FSH 添加浓度的升高而升高,当 FSH 添加浓度 1
IU/mL,卵丘细胞之间的缝隙连接较为松散且发暗。卵丘细胞中的 PAI-1 mRNA 相对
表达量在 IU/mLFSH 时高于其他各处理组;同时卵丘细胞 PLG mRNA 表达水平在
IU/mL FSH 时达到最低,于 IU/mL 和 1 IU/mL 时显著升高(P <)。卵
母细胞 tPA 表达变化显示出与第一极体排出率相似的趋势,即 IU/mL FSH 处理
组的 tPA mRNA 水平和第一极体排出率显著高于其他处理组(P <)。卵母细胞中
PAI-1 mRNA 相对表达量在 IU/mL FSH 时最高,显著高于其他各 FSH 添加组(P
<)。
3. 在添加 FRBI-10 体外成熟 16 h 的各处理组,在只添加 FSH 组的卵丘细胞 tPA
mRNA 相对表达量显著高于其他各处理组(P <);卵母细胞中 tPA mRNA 相对表达
量在只添加 FSH 组显著高于空白组(P <),在只添加 FSH 组,卵丘细胞和卵母细
胞中 PAI-1 mRNA 相对表达量最高,显著高于其他各处理组(P <);卵丘细胞和
卵母细胞 PLG mRNA 相对表达量在只添加 FSH 组却显著低于空白组(P<)。
综合以上研究结果,本研究认为:牛卵丘细胞中 tPA 与 PAI-1 基因的表达受 FSH
正向调节,而 PLG 基因表达却受到 FSH 的抑制;进而推测,tPA-PAI-1 系统对卵丘
细胞在体外成熟过程中的扩散并不起促进作用;在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过
程中,tPA-PAI-1 系统可能参与对牛卵泡排卵过程的调控。同时,tPA 在卵母细胞中
的表达是否与其第一极体排出有关,需进一步实验验证。本实验结果为进一步研究
tPA-