文档介绍：硕士学位论文
论文题目 miRNA 对共刺激分子 CD80、CD86 及其受体
在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义
研究生姓名朱健洁
指导教师姓名张学光教授
汪维鹏副教授
专业名称免疫学
研究方向肿瘤免疫
论文提交日期 2013 年 5 月
miRNA 对共刺激分子 CD80、CD86 及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义中文摘要
中文摘要
前言
活化的 T 淋巴细胞在机体的抗肿瘤、抗感染和自身免疫疾病中发挥重要作用。
T 细胞的活化不仅需要 T 细胞受体(TCR)与抗原肽-MHC 复合物作用产生的第一
信号,还需要表达于抗原提呈细胞(APC)表面的 B7 家族协同刺激分子与 T 细胞
上的相应受体结合产生的第二信号。协同刺激分子与其受体结合产生正性或负性
信号。协同刺激分子 CD80 和 CD86 与其受体 CD28 结合产生正性信号,或与其受
体 CTLA-4 结合提供负性信号,调节 T 细胞活性,进而调控机体的免疫反应。协
同刺激分子 CD80 和 CD86 表达在 APC 细胞上,而在多数的肿瘤组织及细胞中低
表达或不表达,从而不能有效的诱导 T 细胞的活化,引起肿瘤细胞免疫逃逸而促
进肿瘤的发生和发展。通过结直肠癌小鼠模型发现,肿瘤细胞低表达 CD80 分子的
是其逃避免疫监视的机制,并且这与低表达 CD80 分子的未成熟的 DC 细胞的作用
机制相似。microRNA(miRNA)是一类长约 22 个核苷酸的内源性非编码小分子
RNA,通过与靶 mRNA 的 3'-UTR 互补结合,在转录后水平调控基因翻译,在基
因表达中发挥着重要的作用。目前多数的研究发现肿瘤中异常表达的 miRNA 可以
调节细胞的分化、增殖以及凋亡从而影响肿瘤微环境。
第一部分人结直肠癌中异常表达的 miRNA 对 CD80、CD86 及
其受体分子表达的调控作用
【目的】探讨在结直肠癌中异常表达的 miRNA 对 CD80、CD86 及其受体分
子表达的调控作用。
【方法】首先采用实时荧光定量 PCR 法测定 6 例结直肠癌中 CD80、CD86 的
表达量,并对其进行分析。然后,采用 miRNA 芯片技术测定 6 例结直肠癌组织及
I
中文摘要 miRNA 对共刺激分子 CD80、CD86 及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义
癌旁组织中 miRNA 的表达量,统计分析癌组织中异常表达的 miRNA。在这些
miRNA 中,使用生物信息学软件预测可能与 CD80、CD86 及受体 CD28、CTLA-4
基因 3‟-UTR 作用的 miRNA;并用实时荧光定量 PCR 的方法进一步验证预测有作
用的 miRNA 在结直肠癌组织中的表达。最后,采用双荧光素酶报告基因系统分析
这些 miRNA 对 CD80、CD86 及受体 CD28、CTLA-4 基因表达的调控作用。
【结果】(1)实时荧光定量 PCR 结果显示 CD80、CD86 的 mRNA 水平在结
直肠癌及癌旁的表达量没有明显差异。(2)结直肠癌组织中有 30 条 miRNA 表达
明显高于癌旁组织,有 8 条 miRNA 的表达明显低于癌旁组织;其中上调的 miR-21、
miR-34a 可能与 CD80 基因 3‟-UTR 结合,miR-21、miR-31、miR-34a 和 miR-181b
可能与 CD86 基因 3‟-UTR 结合,miR-31、miR-34a、miR-181b、miR-20b和 miR-142-3p
可能与 CD28 基因 3‟-UTR 结合;表达下调的 miR-140-3p、miR-143、miR-145 和
miR-378 可能与 CTLA-4 基因 3‟-UTR 结合。(3)构建了含 CD80、CD86 与受体
CD28、CTLA-4 基因 3‟-UTR 的荧光素酶重组载体,通过酶切和基因测序的方法验
证正确。双荧光素酶报告基因系统分析结果发现,上调表达的 miR-21、miR-31、
miR-20b 和 miR-142-3p 可以分别与 CD80、CD86 和 CD28 基因 3‟-UTR 结合,而
下调表达的 miR-378 和 miR-145 可以与 CTLA-4 基因 3‟-UTR 结合,抑制其表达。
【结论】结直肠癌组织中,miR-21、miR-31、miR-20b 和 miR-142-3p 等 miRNA
表达上调,抑制了 CD80、CD86 和 CD28 的蛋白表达;而下调表达的 miR-378 和
miR-145 可以抑制 CTLA-4 的