文档介绍：硕士学位论文
论文题目 rAAV2介导GDNF联合早期康复训练治疗
大鼠脊髓损伤的实验研究
研究生姓名韩清泉
指导教师姓名沈勇伟
专业名称运动人体科学
研究方向运动生理生化
论文提交日期 2013年3月
rAAV2 介导 GDNF 联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究中文摘要
中文摘要
研究目的:本实验以雄性 SD 大鼠为研究对象,造模后应用 rAAV2 介导 GDNF
联合早期康复训练对脊髓损伤的大鼠进行实验研究,采用运动学评分、组织形态
学和免疫组化等技术,通过分析脊髓损伤大鼠在不同时间点后肢运动功能的变化、
损伤脊髓处 GDNF 的蛋白表达、运动神经元形态和数量的变化等,比较早期康复
训练、基因治疗以及这两种因素的联合作用对脊髓损伤大鼠恢复的影响。
研究方法:本实验采用了 rAAV2 介导 GDNF 基因治疗、早期康复训练及两者
联合三种方法对脊髓重物打击造模后的大鼠进行干预:雄性 SD 大鼠 90 只,随机
分为假手术组(n=18)、自然愈合组(n=18)、基因治疗组(n=18)、康复训练组(n=18)、
联合治疗组(n=18),其中每组按照取材时间点不同随机分为造模后 7d 组(n=6)、
14d 组(n=6)、 21d 组(n=6)。对基因治疗组、联合治疗组大鼠造模成功后 24h 注
射携带有人 GDNF 基因的重组腺相关病毒。对康复训练组、联合治疗组大鼠在造
模成功后第 3d 开始早期康复训练。测试方法与指标:①通过 BBB 评分、斜板实
验来评价脊髓损伤大鼠运动功能的改善。②HE 染色观察损伤后大鼠脊髓运动神经
元、神经胶质细胞的形态数量变化。③荧光显微镜下观察 rAAV2-GDNF-GFP 在损
伤脊髓处的表达。④免疫组化实验采用 SABC(StreptAvidin-plex)试剂
盒来检测损伤脊髓组织中 GDNF 的抗原分布,观察 GDNF 的蛋白表达。
研究结果:①运动学评分得出对脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,康复训练组
的效果好于基因治疗组,且 7d 时有显著性差异(P<), 14d、21d 时有非常显
著性差异(P<)。②HE 染色切片观察得出对运动神经元的保护作用,基因治
疗组要好于康复训练组,且在第 7d 时有显著性差异(P<)。③免疫组化的结果
表明康复训练组的 GDNF 平均光密度值高于自然愈合组,且第 7d 时有显著性差异
(P<),14d、21d 时有非常显著性差异(P<)。④运动学评分、损伤后运
动神经元存活的数量、rAAV2-GDNF-GFP 感染效率及 GDNF 的蛋白表达,联合治
疗组的效果是最好的,且与其它各组相比,在 7d、14d 均有显著性差异(P<)。
研究结论:①rAAV2-GDNF-GFP 在细胞水平上具有感染 293T 细胞能力并且
可以表达 GDNF 蛋白,在组织水平上,损伤区脊髓组织中 GDNF 在转录和蛋白水
平均有表达,其中 14d 时平均光密度值是最高的。②早期康复训练可以使大鼠后
I
中文摘要 rAAV2 介导 GDNF 联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究
肢的运动功能得到明显的改善,在 7d-14d 恢复较快,并且对损伤大鼠脊髓中的
GDNF 表达有促进作用,在 14d 时效果最明显。③rAAV2 介导的 GDNF 基因治疗
能保护受损的脊髓前角运动神经元,显著提高损伤脊髓处 GDNFmRNA 和蛋白的
表达水平,对脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复有促进作用。④联合治疗在促进大鼠
后肢运动功能的恢复、对损伤脊髓前角运动神经元的保护作用及 GDNF 在损伤脊
髓区的表达效果都是最好的,多种方法联合治疗是脊髓损伤治疗的发展趋势。
关键词:rAAV2;GDNF;早期康复训练;脊髓损伤
作者:韩清泉
指导老师:沈勇伟
II
rAAV2 介导 GDNF 联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究英文摘要
Experimental research on acute spinal cord injury in
rats by GDNF mediated by rAAV2 bination with
the early rehabilitative treatment
Abstract
Objective: Choose male SD rats as the experimental subject, use GDNF mediated
by rAAV2 joint early early