文档介绍：SOOCHOW UNIVERSITY
硕士学位论文
论文题目 rAAV2 介导 IGF-1 基因治疗联合康复训练对大
鼠脊髓损伤修复作用的研究
研究生姓名张云
指导教师姓名王维群
专业名称运动人体科学
研究方向运动生理生化
论文提交日期 2013 年 3 月
rAAV2 介导 IGF-1 基因治疗联合康复训练对大鼠脊髓损伤修复作用的研究中文摘要
中文摘要
研究目的:
本实验对大鼠进行脊髓损伤造模后,应用重组腺相关病毒载体(rAAV2)介导
胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因治疗和康复训练联合干预。采用运动功能评分、
组织学和免疫组化等技术,观察大鼠脊髓损伤修复过程中不同时间点后肢运动功
能、损伤脊髓局部神经元数量、损伤组织 IGF-1 表达等指标。比较单纯基因治疗、
单纯康复训练和基因治疗联合康复训练对脊髓损伤的修复效果,丰富相应研究资料。
研究方法:
研究对象为 90 只雄性 SD 大鼠,脊髓损伤造模后随机分为 5 组:假手术组、
自然愈合组、康复训练组、基因治疗组、联合治疗组(基因治疗联合康复训练);
各组再分别设 14d 组、28d 组、42d 组(每组 6 只)。基因治疗组造模后 24h 脊髓
注射 3ul 重组腺相关病毒,康复训练组造模后 7d 进行游泳训练,联合治疗组同时
施加上述两种治疗方法。跟踪测试各组不同时间点下列指标:脊髓组织形态变化、
IGF-1 表达、脊髓前角运动神经元数量,后肢运动功能 BBB 评分、斜扳试验评分。
其中 BBB 评分和斜板实验分别于造模后 1d、3d、7d、14d、28d、42d 测试,组织
学和免疫组化取材时间点为 14d、28d、42d 游泳训练后 2h。实验结果采用
统计软件进行分析。
研究结果:
(1)重组腺相关病毒介导的 GFP 绿色荧光蛋白能够在脊髓组织损伤区域的神
经元和神经胶质细胞中广泛表达,对照组无表达。(2)伤后各组 IGF-1 表达都显
著高于假手术组(P<);随修复时间 14d、28d、42d 自然愈合组呈下降趋势,
到第 42d 基本接近正常水平。其余各组表达稳定,组内比较无显著下降;第 42d
各组 IGF-1 量由高到低为联合治疗组、基因治疗组、康复训练组、自然愈合组、
假手术组,各组间差异非常显著(P<)。(3)伤后各组运动神经元数量均非常
显著低于假手术组(P<);14d、28d、42d 各组运动神经元数量无明显变化,
组内比较无显著差异;第 42d 运动神经元存活数由高向低为:联合治疗(68%)、
基因治疗组(66%)、康复训练组(39%)、自然愈合组(17%),除联合治疗组和
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中文摘要 rAAV2 介导 IGF-1 基因治疗联合康复训练对大鼠脊髓损伤修复作用的研究
基因治疗组无显著差异外,其余各组间差异非常显著(P<)。(4)各组 BBB 评
分和斜板评分趋势相同,于造模后降到最低,此后缓慢升高。1d、3d、7d 各组间
运动评分无显著差异。第 14d 和 28d,联合治疗组 BBB 评分和斜板评分非常显著
高于其余各组(P<);康复训练和基因治疗组也显著高于自然愈合组(P<),
但两组间无差异;第 42d 各组运动评分由高向低为联合治疗组、康复训练组、基
因治疗组、自然愈合组,除康复训练与基因治疗组差异为显著外(P<),其余
各组差异均非常显著(P<)。
研究结论:
(1)重组 2 型腺相关病毒(rAAV2)能够高效感染脊髓神经组织,并介导外
源基因长期稳定表达,是脊髓损伤基因治疗的理想载体。(2)康复训练联合
rAAV2-IGF-1 基因治疗能够保护脊髓损伤后运动神经元免于死亡,促进运动功能恢
复,其效果优于单纯的康复训练或基因治疗。
关键词:脊髓损伤;重组 2 型腺相关病毒;胰岛素样生长因子 1;康复训练
作者:张云
指导教师:王维群
II
rAAV2 介导 IGF-1 基因治疗联合康复训练对大鼠脊髓损伤修复作用的研究英文摘要
Synergistic effects of rAAV2-IGF-1 gene therapy and
rehabilitative training on recovery after spinal cord
injury
Abstracts
Objective:A case of spinal cord injury (SCI) is defined as the occurrence of an
acute traumatic lesion of n