文档介绍：分类号 学校代码 10129
U D C 577 学号 2010301018
Ghrelin 对体外牛卵丘细胞增殖和卵母细胞成熟影响的研究
Effects of Ghrelin on the Bovine Cumulus Proliferation and
Oocytes Maturation in Vitro
申请人:米焱
学科门类:农学
学科专业:基础兽医学
研究方向:动物组织胚胎与发育生物学
指导教师:曹贵方教授
李海军副教授
论文提交日期:二〇一三年六月
摘要
哺乳动物中,Ghrelin被发现是一种协调能量和生殖活动平衡的促进食欲的胃
肠激素,是生长激素促分泌物受体(Growth hormone secretagogue receptor,
GHS-R )的内源性配体,主要在胃组织内分泌细胞中分布。近年,在生殖系统
中发现Ghrelin的高表达,有力的证明Ghrelin在生殖系统中有着比较重要的位置。
卵母细胞的成熟与发育是哺乳动物进行体外受精及胚胎发育的先决条件,但是,
卵母细胞成熟过程受到多重因素的影响。Ghrelin作为近年发现的新型激素,在一
定程度上影响着生殖系统。因此,探索Ghrelin在卵母细胞成熟过程中的潜在作用
对于促进体外受精等相关胚胎工程技术的发展和应用有着重要的理论与实践指
导意义。
研究表明Ghrelin和GHS-R主要在卵巢具有分泌类固醇的黄体细胞和间隙细
胞中表达,在卵母细胞中也有Ghrelin和其受体的表达。而且Ghrelin在体外刺激
颗粒细胞增殖和抑制其凋亡而促进卵泡发育,并且抑制卵母细胞成熟。Ghrelin
是否参与牛卵母细胞成熟,是否可以促进牛卵丘细胞增殖,未见报道。本研究以
牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)为研究对象,运用免疫荧光染色和激光共聚焦
扫描技术、荧光定量RT-PCR、细胞增殖活性检测和Western Blotting等方法对体
外成熟过程中Ghrelin和GHS-R1a在牛卵母细胞和卵丘细胞中的表达情况进行研
究,并在体外培养条件下,添加Ghrelin和其受体抑制剂([D-Lys3]-GHRP-6),
观察其对卵母细胞成熟和卵丘细胞增殖的影响。结果如下:
1. Ghrelin蛋白在牛卵母细胞胞质中表达,而GHS-R蛋白则特异性的定位于卵
母细胞膜表面,在卵丘细胞中均有Ghrelin和GHS-R蛋白表达。
2. 体外成熟过程中卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA相对表达量随着成熟
进程显著下降;卵丘细胞中,Ghrelin mRNA表达量随着成熟时间在8h显著增加
然后在16h显著下降,而GHS-R1a mRNA表达量随着成熟时间逐渐增加。
3. FSH抑制卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达,而FSH显著促进卵丘细
胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达;FSHBI解除FSH对卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a
mRNA表达的抑制作用和FSH对卵丘细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的促进
作用。
4. Ghrelin 和 FSH 显著促进卵丘细胞表达 PCNA 和 BCL-2 mRNA,而
[D-Lys3]-GHRP-6 的添加促使 PCNA 和 BCL-2 mRNA 水平显著降低(P<);
[D-Lys3]-GHRP-6 和 FSH 对凋亡基因 BAX mRNA 的表达无作用,Ghrelin 显著抑
制 BAX mRNA 的表达,[D-Lys3]-GHRP-6 解除 Ghrelin 对 BAX 表达的抑制作用
(P<)。
5. Ghrelin 刺激卵丘细胞 PCNA 蛋白表达,而[D-Lys3]-GHRP-6 抑制 Ghrelin
对 PCNA 表达的促进作用。
6. Ghrelin 和 FSH 明显促进卵丘细胞增殖活性,[D-Lys3]-GHRP-6 抑制卵丘
细胞活性增加(P<),而且[D-Lys3]-GHRP-6 抑制 Ghrelin 和 FSH 促进卵丘
细胞增殖活性的增加。
7. Ghrelin 抑制卵母细胞 BMP15 和 GDF9 mRNA 表达,以及卵母细胞 GVBD
发生率,而这种作用被[D-Lys3]-GHRP-6 解除。
关键词:牛;卵母细胞;卵丘细胞;免疫荧光染色;实时荧光定量 RT-PCR;细
胞增殖活性;Western blotting;GVBD
Effects of Ghrelin on Bovine Cumulus Proliferation and