文档介绍：细胞生长曲线康正强概述细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中,生长曲线的测定是最为基本的指标。细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。步骤?1,取生长状态良好的细胞,消化制成悬液。经计数后,精确地将细胞分别接种于21~30个大小一致的细胞瓶里(常用10ml培养瓶,也可用24孔培养板)每瓶接种细胞量要求一致,加入培养液也一致。细胞接种数不能过多也不能过少。太少细胞适应期太长,太多细胞将很快进入增殖稳定期。一般接种量以7-10天能长满而不发生生长抑制为度。同种细胞的生长曲线先后测定要采用同一接种密度,才能做纵向对比。不同的细胞也要接种细胞数相同,才能进行比较。?2,酌情每天或每隔一天取出三瓶细胞进行计数,计算均值。一般每隔24h取一瓶连续观察1~2周或到细胞总数有明显减少为止(一般需10天左右)。培养3~5天后常要给未计数的细胞换液。?3,以培养时间为横轴,细胞数为纵轴(对数),描绘在半对数坐标纸上。连接成曲线即为该细胞生长曲线。?一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮后贴壁,随后度过长短不一的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期,在达到饱和密度后,细胞停止生长,进入平顶期,然后退化衰老。?典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平台期及退化衰老四个部分,其中的三个不同生长时相(潜伏期、指数生长期和平顶期)是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线,不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力,而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。实验原理结果分析?标准的生长曲线近似S形,一般在传代后第一天细胞数有所减少,经过几天的潜伏适应期,进入对数生长期,达到平台期后生长稳定,最后衰老。?在细胞生长曲线上细胞数量增加一倍的时间称为细胞倍增时间,可以从曲线上换算出。细胞倍增的时间区间即细胞对数生长期。细胞传代实验等多在此区进行。实验汇报?12日,三瓶细胞均铺满瓶底,冻了两瓶,剩下一瓶一传三,预计周五换液。?14日换液,细胞生长约瓶底70%,预计周日冻存两支,再一传三。?16日早晨去见细胞片状浮起,弃掉旧培养液,pbs清洗后见瓶底仍有少量细胞贴附,遂将三瓶消化转移至新瓶(A)继续培养。?分析原因:1,周五细胞密度已经较大,应传代?2,细胞生长特别迅速(很多分裂相),加上密度大,周日情况应是细胞密度抑制及代谢酸中毒。?17日上午见(A)仍有较多单个细胞漂浮,背景很脏(小黑点),反复冲洗,换液,见少量细胞贴附瓶底。?17日下午复苏一支细胞(B)。?18日见(B)细胞部分贴附,换液,细胞较少; (A)个别细胞漂浮,背景较脏。?19日见(B)细胞仍较少; (A)细胞变圆,少量漂浮,换液?20日见(B)细胞略有增多,见分裂相细胞。背景稍脏,预计明日换液(A)细胞仍有悬浮细胞,背景脏,拟丢弃。?分析原因:(A)虽然瓶壁有少量贴壁细胞,但状态应该也不好,加上消化,所以转移至新瓶生长不好。?12141617181920三瓶细胞均铺满瓶底,冻存两瓶,剩下一瓶一传三换液,细胞生长约瓶底70%细胞片状浮起,弃掉旧培养液,pbs清洗后见瓶底仍有少量细胞贴附,遂将三瓶消化转移至新瓶(A)继续培养。(A)仍有较多单个细胞漂浮,背景很脏(小黑点),反复冲洗,换液,见少量细胞贴附瓶底(A)个别细胞漂浮,背景较脏。(A)细胞变圆,少量漂浮,换液(A)细胞仍有悬浮细胞,背景脏,拟丢弃。预计周五换液。预计周日冻存两支,再一传三下午复苏一支细胞(B)(B)细胞部分贴附,换液,细胞较少(B)细胞仍较少;(B)细胞略有增多,见分裂相细胞。背景稍脏,预计明日换液