文档介绍：江苏科技大学
硕士学位论文
健康水貂肠道内益生乳酸菌的筛选、分离、鉴定及应用研究
姓名:杨琛杰
申请学位级别:硕士
专业:特种经济动物饲养
指导教师:李光玉
2011-06-02
摘要
摘要
本研究通过采自不同纬度,不同生境的健康水貂肠道内容物,并从中分离筛选出
两株用于动物试验的同源菌株 MDL1118 和 MDF1104。探讨这两株菌的生理生化性质,
开展核酸鉴定,结合动物试验以验证其益生特性,为其作为水貂益生饲料添加产品及
其适宜添加量提供科学支撑。
实验一:健康水貂肠道内益生乳酸菌的筛选和分离。将采集并置于-80 ˚C 冰箱中
的肠内容物充分解冻后,置无菌匀浆器内得原菌溶液,每个样品依次进行七次梯度稀
释后接种于相应培养基,分别置于恒温培养箱和 CO2 培养箱适温培养。经纯化后,挑
选单菌落涂片,观察记录菌落生长状态。并根据菌落形态、细菌形状、革兰氏染色加
以合并归类。结果初步得到资源菌株共计 95 株(其中乳酸菌 59 株,双歧杆菌 36 株),
并最终选择其中乳酸菌 22 株用于本实验。
实验二:益生乳酸菌的筛选、分离、鉴定和安全性检测。采用 MRS 培养基分离
筛选所得菌株,通过生长特性实验以及生化鉴定实验,并结合核酸鉴定以确定菌株种
属,最后通过菌株安全性检测。结果筛选出符合水貂肠道生长环境,利于动物饲养,
生长旺盛且易于培养的菌株两株,命名为 MDL1118 和 MDF1104,分别属于植物乳杆
菌(Lactobacillus plantarum)和屎肠球菌(us faecium)。
实验三:益生乳酸菌的应用。选择健康雄性丹麦黑貂仔兽 120 只进行为期三个月
的现场试验。挑选个体发育齐整的仔貂随机分成 6 组,每组 20 只。设空白组、实验
菌组和商品菌组三类,共 6 个处理组。将两种菌混合培养,分设高、中、低三个梯度
3×107 cfu/g、3×109 cfu/g、3×1010 cfu/g 进行添食,另外设添加抗生素“杆菌肽锌”和商
品菌种“优比他”(UB-TA)作为对照。并通过观察食性、精神状态、血液指标、消化代
谢情况以及肠道组织切片来验证所分离的目标菌种。结果表明,各处理组间体重无显
著性差异(p>),平均日采食量有显著差异(p=),不同处理组脂肪表观消化
率无显著性差异(p=),3×1010 cfu/g 活菌组脂肪表观消化率最高;试验结果表明,
提高活菌浓度达 3×1010 cfu/g 能使得水貂腹泻率下降 50%,低浓度活菌只能降低 30%;
添加高浓度活菌组水貂死亡率下降高达 15%。采用 3×109 cfu/g 活菌组对血清生化指
标效果最佳,但采用 3×1010 cfu/g 活菌组对肠道病原微生物的抑制效果最佳。添加高
浓度活菌对多项血清生化指标的影响达到极显著水平(p<)。各处理组的小肠绒毛
长度差异极显著(p<),3×1010 cfu/g 活菌组最高。肠壁若干区域存在少量菌落附
着。综合实验结果认为,所选菌株符合微生态制剂作为日粮佐剂的要求。
关键词: 水貂;益生乳酸菌;分离鉴定;生产性能
I
II
Abstract
Abstract
Collected healthy mink's enteric contents from different latitudes and different habitats,
which were isolated from two homologous strains as MDL1118 and MDF1104 from mink's
intestinal tract, this study gain feed additive which was used in animal testing. Used
Investigate the physiological and biochemical properties as well as DNA identification on
these two strains of bacteria. Combine with animal experiments to verify their healthy
characteristics, in order to find suitable micro-ecological preparation on mink's dietary.
Experiment I: Screening and separating probiotic la