文档介绍：实验七氧化亚铁硫杆菌的发酵培养一、实验目的1、 熟练掌握30L发酵罐的结构和使用方法。2、 学****掌握发酵的基木工艺流程及基本操作:包括种子液的制备、培养基配制、灭菌、接种和参数设定等。3、 掌握发酵过程中的参数测定和在线控制,包括:pH、DO、温度、搅拌速度、生物量、残糖含量、产物生成量、消泡和CO?等参数。4、 掌握氧化亚铁硫杆菌生长曲线的测定方法和亚铁离子氧化率的测定方法。二、实验原理在需氧代谢中,菌体生长是以基质代谢和氧的消耗为基础的,因为他们提供了生长所需耍的前体物质和能量,而且从基质和氧的消耗速率也可以反映菌生长的状况和阶段。本实验在30L的发酵罐中对氧化亚铁硫杆菌进行分批发酵,在发酵过程在会出现延迟期、对数生长期、稳定期、衰亡期等阶段,通过测定菌量就可以了解生长情况与阶段。三、实验材料与试剂1、 菌种氧化亚铁硫杆菌由西南科技大学生命科学与工程学院生物工程教研室提供。2、 器材电子天平,高速离心机,分光光度计,蒸汽灭菌锅,超净工作台,生化培养箱,30L发酵罐。3、 试剂(NH4)2SO4,KC1,MgSO4-7H2O,Ca(NO3)2,FeSO4-7H2O,浓H2SO4,K^ChO?。4、 培养基氧化亚铁硫杆菌的培养常采用9K培养基,该培养基由A液和B液组成,具体配方如下:A液(NH4)2SO43g,,,MgSO4-,Ca(NO3),蒸憾水600mL,,121°C灭菌30min;B液:FeSO4•,蒸谓水400mL,调节pH值为2,,现配现用。接种前将A与B液混合,并调节pH值为2。四、实验步骤1、 种子培养基的配制及种子培养种子培养基的配制:按照9K培养基配方,配制2000mL培养基,并用硫酸调好pH,分装到1000mL的摇瓶屮,用棉塞塞住瓶口,并用牛皮纸包扎好瓶口。放入121°C的高压灭菌锅,灭菌20mino接种:在超净工作台上用无菌接种针挑取一针斜面菌种,接入已灭菌的种子培养积极,包扎好瓶口,每接种一瓶种子需换一根接种针,以免染菌。种子培养:放入30°C摇床培养,转速120-150r/min,培养25h。2、 发酵罐的空消对发酵罐空气管路、发酵罐和取样口等进行灭菌。空消时间一般为30-5()min,在灭菌过程中,-,严禁超压。3、 发酵培养基配制按照9K培养基配方,计算出18L培养液所需各成分的含量并称取。用口来水溶解后装入发酵罐,定容至18L。4、 实消将培养基置于发酵罐中,用蒸汽加热灭菌,这种灭菌叫实罐灭菌。为了减少冷凝水的产生,实消开始时,先打开进夹套的蒸汽阀和夹套下排水,并开启搅拌。当温度到90°C时,关闭夹套进气阀,开启进发酵罐内的蒸汽阀,并继续升温到工艺耍求。灭菌过程中应时刻注意罐压,,严禁超压,罐压的控制通过调节排气阀来实现。注意在升温过程中不要开温控开关,否则当上、下设定值定在培养温度时,冷却水管中的水会自动通冷却水,不仅会影响升温速度,浪费蒸汽,更重要的是会引起冷凝水过多,引起培养液浓度变化。实消时间一般为15mino到时间后,关闭进气阀,用冷却水进行冷却。当蒸汽阀门关闭以及通冷却水后,发酵罐的罐压将迅速下降,