文档介绍：β- 葡聚糖酶活性测定β- 葡聚糖是由葡萄糖单体通过β-1,3和β-1,4糖苷键连接而成的 D型葡萄糖聚合物,它主要存在于单子叶禾本科谷实中的糊粉层和胚乳细胞壁中。β- 葡聚糖酶属于水解酶类,能有效地降解β- 葡聚糖分子中的β-1,3和β-1,4糖苷键,使之降解为小分子。由于在饲料中,大麦的β- 葡聚糖含量较高,难以被单胃动物消化利用,而且对饲料中各种养分的消化利用具有明显的干扰和抑制作用,成为麦类饲料中的抗营养因子。在饲料中添加β- 葡聚糖酶,能有效地消除β- 葡聚糖的抗营养作用,促进饲料中各种养分的消化和吸收利用,增进畜禽健康。在啤酒生产中,添加β- 葡聚糖酶可以加快麦汁和啤酒的过滤速度、提高麦汁得率、增加可发酵糖的含量。此外, β- 葡聚糖酶在造纸工业、日化工业等其它许多方面也有着广泛的应用,对β-葡聚糖酶的研究将越来越受到人们的重视。β-葡聚糖酶活力的测定方法主要有 3种:还原糖测定法(分光光度法)、粘度测定法和底物染色法。其中还原糖测定法简便实用,比较准确,而且结果重复性好,是广泛使用的一种酶活测定方法。其原理是:β-葡聚糖酶能将β-葡聚糖降解成寡糖和单糖,其具有的还原基团在沸水浴条件下可与 DNS 试剂发生显色反应,显色的深浅与还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中β- 葡聚糖酶的活力成正比,因此,可以利用比色测定反应液的吸光度值来计算还原糖的生成量,从而得出β- 葡聚糖酶的活力。但在该测定方法的具体操作中存在一些影响酶活力测定结果的因素,本文即对还原糖法测定β- 葡聚糖酶活力的几个重要影响因素进行研究,并得出最佳测定条件。 1 材料与方法 菌株与培养基 发酵产酶菌株黑曲霉( Aspergillus niger ) A47 菌株,由本实验室保藏。 固态发酵培养基麸皮 70g、米糠 27g、 NH4NO g、微量元素液 ml 、蒸馏水 100 ml , pH ,121 ℃灭菌 20 min 。微量元素液的组成为: 2 mol/l HCl 溶液 5 ml 、 FeSO g、 MnSO4 · H g、 ZnCl g、 CoCl g、蒸馏水 100 ml 。 发酵培养条件 250 ml 三角瓶装 10g 培养基(干料计) ,接种量为每瓶 ml 孢子悬液( ×107 cfu/ml) ,发酵温度 30℃,培养 48h。 试剂与溶液 β- 葡聚糖溶液准确称取 gβ-葡聚糖(Amresco) ,加入 5 ml 无水乙醇润湿,再加入 80ml 缓冲液,同时缓慢加热直至β- 葡聚糖完全溶解,冷却至室温,用缓冲液定容至 100 ml ,底物溶液 4℃保存, 2d内用完。 葡萄糖标准贮备溶液(10 mg/ml) 称取烘干至恒重的无水葡萄糖 1g ,精确至 mg ,用水溶解并定容至 100 ml 。 葡萄糖标准溶液分别吸取葡萄糖标准贮备溶液 、 、 、 、 、 、 ml 于10 ml容量瓶中,用水定容至 10 ml ,盖塞,摇匀备用。 DNS 试剂称取 3,5-二硝基水杨酸 10g,置