文档介绍：安徽医科大学
硕士学位论文
川芎嗪对脓毒症致急性肾损伤保护作用的实验研究
姓名:刘海华
申请学位级别:硕士
专业:急诊医学
指导教师:王锦权;陶晓根
20100701
安徽医科大学硕士学位论文
川芎嗪对脓毒症致急性肾损伤保护作用的实验研究
研究生刘海华
导师王锦权教授
陶晓根副教授
(安徽医科大学附属省立医院,合肥,230001)
中文摘要
脓毒症(Sepsis)是感染引起的全身性炎症反应综合征(systemic inflammatory
response syndrome, SIRS),可进展为感染性休克和多器官功能障碍综合征(multiple
organ dysfunction syndrome, MODS);是危重病患者常见的死亡原因之一[1]。据报道,
脓毒症的死亡率达 18%~19%,严重脓毒症的病死率更高达 40%~50%,且其发病
率还在以每年 %~9%的速度增长。目前,脓毒症导致组织器官功能障碍的病理
生理学机制还不十分明确,因此,深入探索脓毒症的病理生理过程及其发生机制,
寻找新的治疗方法,对于降低脓毒症患者的病死率具有重要意义。肾脏是容易遭受
到打击的靶器官之一,在急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的早期,肾小球滤过
率(glomerular filtration rate, GFR)下降,或 GFR 尚正常而肾脏已出现组织学及生物
标志物等损伤性改变时,又可使脓毒症患者的病死率明显增加[2];
川芎嗪(tetramethylpyrazine, TMP)是从伞形科植物川芎中提取的一种生物碱单
体,具有抑制机体过度炎症反应,减少氧自由基(oxygen free radical,OFR)产生、
拮抗钙离子和维持线粒体膜结构稳定[3]、改善微循环和抗凝血等作用,被应用于急、
慢性肾功能衰竭治疗[4]。本实验研究探讨脂多糖(haride, LPS)制备的
脓毒症造成AKI的发病机制,给予TMP干预后,通过观察实验动物肾脏水肿程度,
尿量变化,半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (cystatin C,Cys C)、血管性假性血友病因
子( von Willebrand factor, vWF)测定和肾脏病理学观察,研究TMP对脓毒症致AKI
的作用机制,评价TMP对脓毒症致AKI预防和治疗的效果,为临床治疗脓毒症致
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AKI提供新的有效治疗手段。
目的:
制备脓毒症兔实验动物模型;通过对肾脏的水肿程度、尿量、血半胱氨酸蛋
白酶抑制剂 C、血管性假性血友病因子测定和肾脏病理学观察,探讨脓毒症所致
AKI 的发病机制;使用 TMP 进行预防和治疗,观察 TMP 对脓毒症所致肾损伤的
预防和治疗作用效果,探讨其作用机制。
方法:
36 只新西兰大白兔随机分为 3 组:正常空白对照组(C 组)、脓毒症模型组
(M 组)和 TMP 预防组(P 组),每组 12 只。静脉注射脂多糖(LPS,1mg/kg)
制备脓毒症实验动物模型,正常空白对照组给予等量的生理盐水,P 组在静脉注射
LPS 后相继静脉注射 TMP (60 mg/kg);达到脓毒症诊断标准[5-6]后,观察 4 h,收集
尿量,实验结束时测定血半胱氨酸蛋白酶抑制剂 C(Cys-C)浓度;处死实验动物
后提取肾脏组织,测定肾脏含水率,取肾组织进行病理学观察,用免疫组化方法
检测肾组织 vWF(vWF)
结果:
实验动物在静脉注射 LPS 1mg/kg 后,出现发热(肛温超过自身正常值 1℃),
心率和呼吸频率逐渐加快,升高超过 20%以上,确立为脓毒症实验兔模型制备成
功。
、4 h 尿量及血 Cys-C 比较
与 M 组比较,C 和 P 组肾脏含水率、血清 Cys-C 较低(P<),第 4 h 尿量明
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显增多(P<);C 组和 P 组间各项比较差异无统计学意义(P>)。
3. 肾脏 vWF 检测
用免疫组化技术检测 vWF。在光镜下,M 组的肾小球毛细血管内皮细胞和肾
间质毛细血管内皮细胞下的 vWF 染色部分阳性(++)。P 组肾间质和肾小球细胞
毛细血管内皮细胞下的 vWF 染色较少(+),与 C 组的差异不明显。
HE染色表现在光镜下观察可见,M组肾小球有少量纤维组织增生,同时伴有
炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主;肾小球肿胀比较明显,里面结构