文档介绍：河南大学
硕士学位论文
对甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡
的作用
姓名:王德辉
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:刘彬
2011-06
摘要
目的:通过筛查 10 种喹诺酮类衍生物,选择一种对人肝癌 SMMC-7721 细胞增殖
有显著抑制作用的化合物,对其诱导细胞凋亡的作用及可能的信号通路进行初步研究,
为该类化合物开发利用提供实验依据。
方法: MTT 法对 10 种喹诺酮类衍生物进行初步筛查;流式细胞术 PI 单色标记法
检测细胞周期的改变;Hoechst 33258/PI 染色法荧光显微镜观察凋亡细胞形态;琼脂糖
凝胶电泳检测细胞凋亡 DNA 梯状条带;TUNEL 法检测细胞凋亡率;高内涵活细胞成像
系统检测细胞线粒体膜电位(∆Ψm)变化;Western blot 检测 Caspase-8、Caspase-9、
Caspase-3、p53、Bcl-2 和 Bax 蛋白表达的变化。
结果:对 10 种氟喹诺酮酰腙类化合物(FQ1~FQ10)细胞增殖作用筛查结果显示,
化合物 FQ3、FQ8 和 FQ10 对人肝癌 SMMC-7721 细胞增殖均有抑制作用,其中对甲氧
基肉桂醛左氧氟沙星酰腙(FQ10)对细胞增殖抑制率最高,在 µmol·L-1 浓度,作
用 24h 细胞增殖抑制率与对照组比较有显著性差异(P<),在 µmol·L-1~10
-1
µmol·L 的浓度范围,细胞增殖抑制率更为显著(P<)。作用 24 h 的 IC50 值达
-1
µmol·L ,且呈浓度和时间依赖性;细胞周期检测显示,随着 FQ10 浓度的增加,G0/G1
期细胞减少,S 期增加,细胞周期阻滞在 G2/M 期;荧光染色观察细胞核形态变化显示,
不同浓度的 FQ10 作用于细胞后,凋亡细胞增加并可见染色质凝集、细胞核碎裂成碎片
等典型细胞凋亡特征性变化。TUNEL 法计量结果显示,随着 FQ10 作用浓度的增加,
凋亡率增高,呈剂量依赖性,实验统计药物处理组细胞凋亡率均高于对照组(P﹤),
琼脂糖凝胶电泳显示,FQ10 作用浓度达 10 µmol·L-1 时出现凋亡细胞典型的梯状 DNA 条
带;Western blot 检测结果显示,不同浓度 FQ10 药物处理组的 p53、Bax、Caspase-9 和
Caspase-3 蛋白表达量高于对照组,其中 Caspase-3 活性裂解片段显著增加,Bcl-2 蛋白
表达量较对照组降低,Caspase-8 蛋白表达量无显著变化。
结论:FQ10 具有抑制人肝癌 SMMC-7721 细胞增殖、阻滞细胞周期进程作用,抑
制作用呈浓度和时间依赖性;FQ10 有诱导人肝癌 SMMC-7721 细胞凋亡作用,作用机
制与线粒体凋亡通路有关。
关键词:喹诺酮类衍生物,肝癌细胞,细胞周期,凋亡,线粒体膜电位
I
ABSTRACT
Objective: 10 quinolone derivatives as candidate agents were screened for find pounds
which have high inhibiting activity to proliferation of SMMC-7721 cells, and studied the antineoplastic
mechanism of pounds in order to provide references for the development of new anticancer drugs.
Methods: The proliferation of the cells and the inhibition effect of quinolone derivatives on the
cell proliferation were examined by MTT assay. PI fluorescence staining with flow cytometric analysis was
used to analysis cell cycle. Cell apoptosis was observed by fluorescence microscope techniques with
Hoechst 33258 associated with propidium iodide (PI) staining and TUNEL assay. DNA ladder