文档介绍：河南大学
硕士学位论文
肉桂醛氧氟沙星酰腙诱导人胰腺癌细胞凋亡作用的研究
姓名:吕艳红
申请学位级别:硕士
专业:肿瘤学
指导教师:康玉华
2011-04
摘要
胰腺癌是临床发病隐匿、发展迅速、预后极差的一种恶性肿瘤。受胰腺与
周围组织及器官的解剖学关系的影响,早期发生周围组织、器官侵犯和远处转
移。由于早期无明显的特异性症状和体征,并缺乏可靠的早期诊断方法,确诊
时多属晚期,预后极差,约有 83 %的患者 1 年内死亡。目前认为早期手术切除
是胰腺癌唯一的可治愈性方法, 但 85%的胰腺癌患者就诊时已属晚期或发生转
移, 手术切除率仅 10%-15%,因此化疗在胰腺癌综合治疗中尚占有重要的位置,
需要研究开发新的药物以改善疗效。
喹诺酮类化合物是临床常用的抗菌药物,这类药物作用于细菌 DNA 回旋酶
(gyrase),抑制细菌 DNA 复制、转录及损伤修复等过程,抑制细菌增殖并杀
灭细菌,临床应用效果良好。由于真核细胞的拓扑抑构酶Ⅱ(topoisomerase
Ⅱ,TopoⅡ)与细菌 DNA 回旋酶的活性部位酪氨酸残基周围的序列具有同源性,
二者催化功能相似。因此,人们希望通过结构改造能够合成抑制哺乳动物拓扑
抑构酶Ⅱ活性的喹诺酮类抗肿瘤药物。本研究利用酰胺类化合物取代氟喹诺酮
羧酸的 C-3 羧基合成的氧氟沙星 C-3 酰腙衍生物,探讨该类化合物对人胰腺癌
BxPC-3 细胞的增殖抑制和促凋亡作用,以期筛选出治疗胰腺癌的候选药物,并
为进一步开发和利用提供实验依据。
目的通过对 13 种喹诺酮衍生物的初步筛查,寻找对人胰腺癌 BxPC-3
细胞增殖有显著抑制作用的化合物,对其作用机制进行初步研究,为该类化合
物的开发利用提供理论依据。
方法 MTT 法检测化合物对 BxPC-3 增殖的抑制作用;Hoechst33258/PI
染色荧光显微镜观察细胞凋亡核形变化;TUNEL 法观察细胞凋亡并检测细胞凋
I
亡率;DNA 琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞特征性梯状 DNA 条带;Western-blot
检测细胞凋亡相关蛋白表达的变化。
结果 MTT 法测定 13 种化合物对胰腺癌细胞株 BxPC-3 细胞增殖的抑制作
用。其中 FQ4 、 FQ16 两种化合物对该细胞增殖具有显著的抑制作用, 在
·L-1 ~10μmol·L-1 的浓度范围内能显著抑制细胞增殖。FQ16 对 BxPC-3
细胞增殖抑制作用最强且呈浓度、时间依赖关系,作用于细胞 24h 的 IC50 值是
·L-1;Hoechst33258/PI 荧光染色观察细胞形态学变化,显示凋亡细胞染
色质凝集、细胞核碎裂和凋亡小体形成等典型细胞凋亡特征性变化,晚期凋亡
细胞可见 PI 染色。FQ16 达 - μmol·L-1 浓度作用细胞 24h,DNA 琼脂糖
凝胶电泳显示凋亡细胞典型的梯状 DNA 条带。TUNEL 实验统计细胞凋亡率显
著高于对照组(P﹤);Western blot 结果显示,p53、bax、caspase-8、caspase-9
和 caspase-3 蛋白量表达较对照组升高, bcl-2 蛋白表达量降低。 caspase-8、
caspase-9 活性裂解片段显著增加,线粒体细胞色素 c 降低,胞浆细胞色素 c 升
高。
结论
1. FQ16 显著抑制胰腺癌 BxPC-3 细胞增殖作用,其抑制作用效果呈浓度和
时间依赖性。
2. FQ16 能够诱导胰腺癌 BxPC-3 细胞凋亡,此作用与线粒体凋亡通路有关。
关键词肉桂醛氧氟沙星酰腙,胰腺癌,细胞增殖,凋亡,细胞色素 c
II
Abstract
Pancreatic cancer is a kind of malignant tumor with the clinical onset concealment, the
rapid development and poor prognosis. By the influence of the anatomical relation of the
pancreas and surrounding tissues ans, it often happens surrounding tissues, organs
infringed and distant metastasis. Because there are no apparent specific symptoms and signs at
the early period, and the lack